论文目录 | |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-21页 |
| · IL-10 基因的简介 | 第14-19页 |
| · IL-10 基因和 IL-10 蛋白 | 第14-15页 |
| · IL-10 的分泌细胞 | 第15-16页 |
| · IL-10 受体 | 第16-17页 |
| · IL-10 的生物学特性 | 第17-18页 |
| · IL-10 在肿瘤模型中的应用 | 第18-19页 |
| · 鸡血型的研究 | 第19-20页 |
| · 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| · 实验材料 | 第21页 |
| · 实验动物、细胞系与工程菌 | 第21页 |
| · 生物学试剂 | 第21页 |
| · 主要仪器设备 | 第21页 |
| · ChIL-10 重组蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第21-24页 |
| · 引物设计 | 第21-22页 |
| · 鸡脾细胞的分离培养 | 第22页 |
| · 鸡外周血淋巴细胞的分离培养 | 第22-23页 |
| · ChIL-10 基因的扩增 | 第23页 |
| · 重组质粒的构建 | 第23页 |
| · 重组 ChIL-10 蛋白在 E.coli 中的表达 | 第23-24页 |
| · ChIL-10 多抗的制备及 Western blot 鉴定 | 第24页 |
| · 稳定表达 ChIL-10 蛋白 CHO-K1 细胞系的建立 | 第24-27页 |
| · 引物设计 | 第24-25页 |
| · ChIL-10-F 和 ChIL-10-M 基因的扩增 | 第25页 |
| · 真核重组质粒的构建 | 第25页 |
| · 转染 | 第25-26页 |
| · 稳定表达 ChIL-10F 与 ChIL-10M 蛋白的 CHO-K1 细胞的筛选 | 第26页 |
| · 稳定表达 ChIL-10 蛋白细胞系的鉴定 | 第26-27页 |
| · ChIL-10 单克隆抗体的制备 | 第27-31页 |
| · 免疫 | 第27-28页 |
| · 融合 | 第28-29页 |
| · IFA 筛选阳性杂交瘤细胞 | 第29页 |
| · 杂交瘤细胞的克隆化 | 第29页 |
| · 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第29页 |
| · 单抗特性的鉴定 | 第29-30页 |
| · 单抗腹水的制备及效价测定 | 第30页 |
| · 对鸡外周血淋巴细胞中 IL-10 蛋白的检测 | 第30-31页 |
| · 鸡血型判定血清学方法的建立 | 第31-34页 |
| · 鸡基因组 DNA 的提取 | 第31页 |
| · BF 基因外显子 2 和 3 的扩增 | 第31页 |
| · 同种异型抗血清的制备 | 第31-32页 |
| · 血清血凝效价的测定 | 第32-33页 |
| · B15 抗血清特异性的检测 | 第33页 |
| · B15 纯合鸡和杂合鸡的血凝检测 | 第33页 |
| · 测序比对验证 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-50页 |
| · ChIL-10 重组蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第34-37页 |
| · ChIL-10 基因的扩增 | 第34页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| · ChIL-10 重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第35-36页 |
| · ChIL-10 重组蛋白兔抗血清的 Western blot 分析 | 第36-37页 |
| · CHO-ChIL-10F 和 CHO-ChIL-10M 细胞系的建立 | 第37-43页 |
| · ChIL-10F 和 ChIL-10M 基因的扩增 | 第37页 |
| · 真核重组质粒 N1-ChIL-10F 和 N1-ChIL-10M 的鉴定 | 第37-38页 |
| · G418 最佳筛选浓度的确定 | 第38页 |
| · CHO-ChIL-10 细胞系的鉴定 | 第38-43页 |
| · ChIL-10 单克隆抗体的制备 | 第43-45页 |
| · ChIL-10 单抗的筛选 | 第43页 |
| · 亚类鉴定结果 | 第43页 |
| · 与原核重组蛋白 ChIL-10 的 Western blot 的结果 | 第43-44页 |
| · 单抗腹水的 IFA 效价 | 第44页 |
| · 利用单抗检测鸡外周血中的 IL-10 蛋白 | 第44-45页 |
| · 不同 MHC-B 单倍型鸡血型血清学方法的建立 | 第45-50页 |
| · BF 基因外显子 2 和 3 的扩增 | 第45-46页 |
| · 各抗血清血凝效价的测定 | 第46-47页 |
| · B15 抗血清的特异性检测 | 第47-48页 |
| · B5/B15 杂合鸡和纯合鸡的血型鉴定 | 第48-49页 |
| · 24 羽被检鸡的 BF 基因序列分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| · 稳定表达 ChIL-10 蛋白两种细胞系表达量的差异 | 第50页 |
| · 抗血清的种属差异性 | 第50页 |
| · 杂交瘤细胞的筛选 | 第50-51页 |
| · 鸡血型鉴定方法的选择 | 第51页 |
| · B 单倍型鸡对禽病免疫学研究的意义 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第64
页 |
