论文目录 | |
| 中文摘要 | 第10-11
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| 英文摘要 | 第11-13
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| 1 引言 | 第13-23
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| · BVDV形态和理化学特性 | 第13
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| · BVDV的抗原多样性及分型 | 第13-14
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| · BVDV基因组结构和功能 | 第14-18
页 |
| · BVDV的5′-UTR和3′-UTR | 第14-15
页 |
| · BVDV的大开放阅读框架 | 第15-18
页 |
| · P80基因在病毒的复制及病毒与宿主细胞关系中的作用 | 第18-19
页 |
| · p80蛋白的丝氨酸蛋白酶活性 | 第18-19
页 |
| · p80的RNA解旋酶活性 | 第19
页 |
| · p80蛋白的NTPase活性 | 第19
页 |
| · 牛病毒性腹泻疫苗的研究进展 | 第19-20
页 |
| · 牛病毒性腹泻ELISA诊断方法的研究进展 | 第20-22
页 |
| · 抗原捕获ELISA | 第20
页 |
| · 间接ELISA | 第20
页 |
| · ABS-ELISA | 第20-21
页 |
| · 双抗体夹心ELISA | 第21
页 |
| · 单抗夹心ELISA | 第21
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| · 竞争ELISA | 第21
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| · M-ELISA | 第21-22
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| · 本试验研究的目的和意义 | 第22-23
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| 2 材料与方法 | 第23-32
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| · 材料 | 第23-24
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| · 病毒与抗体 | 第23
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| · 质粒与菌株 | 第23
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| · 主要试剂 | 第23
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| · 扩增引物 | 第23-24
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| · 主要仪器 | 第24
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| · 实验方法 | 第24-32
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| · BVDV基因组RNA的提取 | 第24-25
页 |
| · BVDV p80A、p80B和p80C基因片段的克隆 | 第25
页 |
| · BVDV p80A、p80B和p80C基因片段克隆载体的构建 | 第25-27
页 |
| · BVDV p80A、p80B和p80C基因片段原核表达载体的构建 | 第27-29
页 |
| · p80A、p80B和p80C基因片段在原核表达系统中的表达 | 第29-30
页 |
| · p80A、p80B和p80C基因片段表达产物Western blotting分析 | 第30
页 |
| · p80B基因片段原核表达蛋白的可溶性分析 | 第30
页 |
| · p80B表达产物的纯化 | 第30-31
页 |
| · 间接ELISA方法的初步建立 | 第31-32
页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42
页 |
| · BVDV P80A、P80B和P80C基因片段的克隆 | 第32-33
页 |
| · BVDV p80A基因片段的PCR扩增结果 | 第32
页 |
| · BVDV p80B基因片段的PCR扩增结果 | 第32-33
页 |
| · BVDV p80C基因片段的PCR扩增结果 | 第33
页 |
| · 重组质粒PMD18-T-P80A(P80B、P80C)的鉴定 | 第33-35
页 |
| · 重组质粒pMD18-T-p80A的鉴定 | 第33-34
页 |
| · 重组质粒pMD18-T-p80B的鉴定 | 第34
页 |
| · 重组质粒pMD18-T-p80C的鉴定 | 第34-35
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| · BVDV P80A、P80B和P80C基因片段测序结果及序列分析 | 第35
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| · p80A基因片段测序结果及序列分析 | 第35
页 |
| · p80B基因片段测序结果及序列分析 | 第35
页 |
| · p80C基因片段测序结果及序列分析 | 第35
页 |
| · BVDV PSOA、P80B和P80C基因片段重组表达载体的鉴定 | 第35-37
页 |
| · 重组质粒pGEX-6P-p80A的鉴定 | 第35-36
页 |
| · 重组质粒pET-30a-p80A的鉴定 | 第36
页 |
| · 重组质粒pGEX-6P-p80B的鉴定 | 第36-37
页 |
| · 重组质粒pGEX-6P-p80C的鉴定 | 第37
页 |
| · BVDV P80A、P80B和P80C基因片段在大肠杆菌中的表达 | 第37-40
页 |
| · p80A基因片段表达产物的SDS-PAGE检测 | 第37-38
页 |
| · p80B基因片段表达产物的SDS-PAGE检测 | 第38-39
页 |
| · p80C基因片段表达产物的SDS-PAGE检测 | 第39-40
页 |
| · 表达蛋白的WESTERN BLOTTING分析 | 第40
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| · P80B基因片段原核表达蛋白的可溶性分析 | 第40
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| · P80B基因片段表达产物的纯化和WESTERN BLOTTING分析 | 第40-41
页 |
| · 间接ELISA方法的初步建立 | 第41-42
页 |
| 4 讨论 | 第42-45
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| · 表达P80截短片段的原因 | 第42
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| · 密码子的使用频率及宿主菌的选择对蛋白表达的影响 | 第42
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| · 重组P80B蛋白WESTERN BLOTTING检测结果分析 | 第42-43
页 |
| · P80蛋白的主要抗原决定域分析 | 第43-44
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| · 重组P80B蛋白应用及实践意义 | 第44-45
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| 5 结论 | 第45-46
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| 致谢 | 第46-47
页 |
| 参考文献 | 第47-53
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| 附录 | 第53-57
页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第57页 |
