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酿酒酵母中水杨酸生物合成研究
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酿酒酵母中水杨酸生物合成研究
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-18页
第一章 绪论第18-26页
　　1.1 引言第18-19页
　　1.2 水杨酸简介第19页
　　　　1.2.1 水杨酸的结构及性质第19页
　　　　1.2.2 水杨酸的应用第19页
　　1.3 酿酒酵母中的莽草酸途径第19-22页
　　　　1.3.1 途径介绍第19-20页
　　　　1.3.2 关键酶及其调控第20-21页
　　　　1.3.3 利用莽草酸途径其他生物合成第21-22页
　　1.4 水杨酸合成的研究进展第22-23页
　　　　1.4.1 化学法合成水杨酸第22-23页
　　　　1.4.2 生物合成水杨酸进展第23页
　　　　1.4.3 水杨酸对酿酒酵母毒性研究第23页
　　1.5 本课题立项依据及研究内容第23-26页
　　　　1.5.1 立项依据第23-24页
　　　　1.5.2 研究内容第24-25页
　　　　1.5.3 创新点第25-26页
第二章 水杨酸外源途径构建与表达发酵第26-44页
　　2.1 引言第26页
　　2.2 实验材料第26-28页
　　　　2.2.1 菌株第26页
　　　　2.2.2 载体第26-27页
　　　　2.2.3 培养基第27-28页
　　　　2.2.4 实验仪器及试剂第28页
　　2.3 实验方法第28-35页
　　　　2.3.1 引物设计第29-30页
　　　　2.3.2 PCR反应第30页
　　　　2.3.3 胶回收第30-31页
　　　　2.3.4 酶切第31页
　　　　2.3.5 柱回收第31-32页
　　　　2.3.6 连接体系第32页
　　　　2.3.7 大肠杆菌化学法转化第32-33页
　　　　2.3.8 阳性克隆转化筛选第33页
　　　　2.3.9 大肠杆菌质粒提取第33-34页
　　　　2.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法第34-35页
　　　　2.3.11 水杨酸液相检测第35页
　　2.4 实验结果第35-42页
　　　　2.4.1 水杨酸标准曲线第35-36页
　　　　2.4.2 水杨酸外援途径构建第36-38页
　　　　2.4.3 重组质粒酵母化转及发酵第38-40页
　　　　2.4.4 水杨酸添加抑制实验第40-42页
　　2.5 本章小结第42-44页
第三章 增强酿酒酵母自身莽草酸途径代谢通量提高水杨酸产量第44-56页
　　3.1 引言第44页
　　3.2 实验材料第44-45页
　　　　3.2.1 菌株第44页
　　　　3.2.2 载体第44-45页
　　　　3.2.3 培养基第45页
　　　　3.2.4 实验仪器及试剂第45页
　　3.3 实验方法第45-48页
　　　　3.3.1 引物设计第46-47页
　　　　3.3.2 PCR反应第47页
　　　　3.3.3 胶回收第47页
　　　　3.3.4 酶切第47页
　　　　3.3.5 柱回收第47页
　　　　3.3.6 连接体系第47页
　　　　3.3.7 大肠杆菌化学法转化第47页
　　　　3.3.8 阳性克隆转化筛选第47页
　　　　3.3.9 大肠杆菌质粒提取第47页
　　　　3.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法第47页
　　　　3.3.11 水杨酸液相检测第47页
　　　　3.3.12 酿酒酵母基因组提取第47-48页
　　3.4 实验结果第48-54页
　　　　3.4.1 过表达DAHP合酶Aro4质粒构建与发酵第48-50页
　　　　3.4.2 基因组整合替换Aro1启动子为TEF1启动子并发酵产水杨酸第50-54页
　　3.5 本章小结第54-56页
第四章 通过异源表达大肠杆菌莽草酸途径提高水杨酸产量第56-74页
　　4.1 引言第56-57页
　　4.2 实验材料第57-59页
　　　　4.2.1 菌株第57页
　　　　4.2.2 载体第57-58页
　　　　4.2.3 培养基第58-59页
　　　　4.2.4 实验仪器及试剂第59页
　　4.3 实验方法第59-62页
　　　　4.3.1 引物设计第60-62页
　　　　4.3.2 PCR反应第62页
　　　　4.3.3 胶回收第62页
　　　　4.3.4 酶切第62页
　　　　4.3.5 柱回收第62页
　　　　4.3.6 连接体系第62页
　　　　4.3.7 大肠杆菌化学法转化第62页
　　　　4.3.8 阳性克隆转化筛选第62页
　　　　4.3.9 大肠杆菌质粒提取第62页
　　　　4.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法第62页
　　　　4.3.11 水杨酸液相检测第62页
　　　　4.3.12 酿酒酵母质粒提取第62页
　　4.4 实验结果第62-73页
　　　　4.4.1 大肠杆菌莽草酸途径模块一质粒构建第63-64页
　　　　4.4.2 大肠杆菌莽草酸途径模块二质粒构建第64-66页
　　　　4.4.3 大肠杆菌莽草酸途径模块三质粒构建第66-68页
　　　　4.4.4 大肠杆菌莽草酸途径模块二模块三联合构建第68-69页
　　　　4.4.5 大肠杆菌莽草酸途径模块发酵第69-73页
　　4.5 本章小结第73-74页
第五章 通过增强磷酸戊糖途径提高水杨酸产量第74-88页
　　5.1 引言第74页
　　5.2 实验材料第74页
　　　　5.2.1 菌株第74页
　　　　5.2.2 载体第74页
　　　　5.2.3 培养基第74页
　　　　5.2.4 实验仪器及试剂第74页
　　5.3 实验方法第74-77页
　　　　5.3.1 引物设计第75-76页
　　　　5.3.2 PCR反应第76页
　　　　5.3.3 胶回收第76页
　　　　5.3.4 酶切第76页
　　　　5.3.5 柱回收第76页
　　　　5.3.6 连接体系第76页
　　　　5.3.7 大肠杆菌化学法转化第76页
　　　　5.3.8 阳性克隆转化筛选第76页
　　　　5.3.9 大肠杆菌质粒提取第76页
　　　　5.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法第76-77页
　　　　5.3.11 水杨酸液相检测第77页
　　5.4 实验结果第77-86页
　　　　5.4.1 PPP途径单基因表达质粒构建第77-80页
　　　　5.4.2 PPP途径多基因组合表达质粒构建第80-83页
　　　　5.4.3 PPP途径单基因表达发酵第83-84页
　　　　5.4.4 PPP途径多基因组合表达发酵第84-86页
　　5.5 本章小结第86-88页
第六章 结论与展望第88-90页
　　6.1 结论第88页
　　6.2 展望第88-90页
参考文献第90-94页
附录第94-96页
致谢第96-98页
研究成果及发表的学术论文第98-100页
作者和导师简介第100-101页
附件第101-102页

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