论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 研究背景 | 第14-19页 |
| 1.2.1 昆虫病原真菌致病机理的研究进展 | 第14页 |
| 1.2.2 昆虫病原真菌工业生产现状 | 第14页 |
| 1.2.3 乙醇脱氢酶基因功能研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.4 真核生物启动子研究进展 | 第16页 |
| 1.2.5 真核生物启动子预测生物学研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.6 昆虫病原真菌启动子功能研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 课题立题依据与研究目的 | 第19页 |
| 1.4 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 1.5.1 绿僵菌乙醇脱氢酶1基因功能研究 | 第20-21页 |
| 1.5.2 乙醇脱氢酶1启动子结构与功能研究 | 第21页 |
| 1.6 本研究创新之处 | 第21-23页 |
| 2 绿僵菌MaADH1的功能研究 | 第23-53页 |
| 2.1 主要材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 供试菌株和昆虫 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要培养基、实验溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要设备 | 第25-26页 |
| 2.2 主要方法 | 第26-39页 |
| 2.2.1 连接产物转化大肠杆菌 | 第26页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌AGL-1 感受态细胞的制备及电转化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 根癌农杆菌与绿僵菌共培养 | 第27-28页 |
| 2.2.4 微量真菌基因组快速提取 | 第28页 |
| 2.2.5 大量真菌基因组提取 | 第28页 |
| 2.2.6 MaADH1基因生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.7 MaADH1 cDNA ORF全长克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.8 MaADH1基因的敲除和回复载体的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.9 敲除和回复转化子的初步筛选 | 第33-34页 |
| 2.2.10 Southern杂交验证MaADH1敲除和回复转化子 | 第34-36页 |
| 2.2.11 生长特性分析 | 第36页 |
| 2.2.12 抗逆分析 | 第36页 |
| 2.2.13 毒力测定 | 第36-37页 |
| 2.2.14 液体培养基中乙醇含量测定 | 第37页 |
| 2.2.15 液体培养基中乙醛含量测定 | 第37页 |
| 2.2.16 真菌RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2.17 qRT-PCR | 第38-39页 |
| 2.2.18 数据统计分析 | 第39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-50页 |
| 2.3.1 MaADH1基因生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 2.3.2 MaADH1敲除和回复载体的构建及验证 | 第41-42页 |
| 2.3.3 MaADH1基因表达模式分析 | 第42页 |
| 2.3.4 MaADH1基因对蝗绿僵菌生长特性的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.5 MaADH1基因对蝗绿僵菌抗逆境压力的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.6 蝗绿僵菌MaADH1基因缺失对毒力的影响 | 第44页 |
| 2.3.7 低氧条件下MaADH1基因对蝗绿僵菌生物量的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.8 低氧条件下MaADH1基因的表达量及溶氧量分析 | 第45-46页 |
| 2.3.9 低氧条件下液体培养基中乙醇和乙醛含量测定 | 第46-47页 |
| 2.3.10 低氧条件下MaADH1酶比活性测定 | 第47-48页 |
| 2.3.11 低氧条件下MaADH1调控绿僵菌产孢 | 第48-49页 |
| 2.3.12 乙醛调控蝗绿僵菌产孢 | 第49-50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-53页 |
| 3 主要结论和后续工作建议 | 第53-55页 |
| 3.1 主要研究结论 | 第53页 |
| 3.2 后续试验建议 | 第53-55页 |
| 4 绿僵菌Ma ADH1启动子结构与功能研究 | 第55-67页 |
| 4.1 主要材料 | 第55页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第55页 |
| 4.1.2 质粒载体 | 第55页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 4.1.4 主要培养基配置和溶液 | 第55页 |
| 4.1.5 主要设备 | 第55页 |
| 4.2 主要方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 大肠杆菌转化 | 第55页 |
| 4.2.2 农杆菌感受态制备、转化 | 第55页 |
| 4.2.3 农杆菌介导的绿僵菌的转化 | 第55页 |
| 4.2.4 PMaADH1序列的获取及生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 4.2.5 PMaADH1缺失突变载体的构建 | 第56-57页 |
| 4.2.6 微量真菌基因组快速提取 | 第57页 |
| 4.2.7 PMaADH1的 5’缺失转化子的筛选 | 第57页 |
| 4.2.8 大量真菌基因组的提取 | 第57页 |
| 4.2.9 Southern blot检验转化子PMaADH1的拷贝数 | 第57页 |
| 4.2.10 PMaADH1提取 | 第57页 |
| 4.2.11 荧光定量PCR检测PMaADH1缺失片段启动活性 | 第57页 |
| 4.2.12 数据统计分析 | 第57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 4.3.1 PMaADH1序列分析 | 第57-60页 |
| 4.3.2 PMaADH15’缺失转化子验证 | 第60-61页 |
| 4.3.3 MaADH1在产孢时期特异高表达 | 第61-62页 |
| 4.3.4 PMaADH1缺失突变分析 | 第62-63页 |
| 4.3.5 PMaADH1特异表达胶原蛋白（Mcl1）显著增强绿僵菌的毒力 | 第63-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-67页 |
| 5 主要结论与后续工作建议 | 第67-69页 |
| 5.1 主要结论 | 第67页 |
| 5.2 后续工作 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| A. 作者在攻读硕士学位期间发表论文的目录 | 第79页 |
| B. 序列 | 第79-82页 |
