论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11
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| Abstract | 第11-14
页 |
| 第一章 前言 | 第14-29
页 |
| · α-半乳糖苷酶研究概况 | 第14-17
页 |
| · α-半乳糖苷酶的结构特点 | 第14
页 |
| · α-半乳糖苷酶的专一性 | 第14-15
页 |
| · α-半乳糖苷酶的活性研究 | 第15
页 |
| · α-半乳糖苷键的分布 | 第15
页 |
| · α-半乳糖苷类键的应用 | 第15-17
页 |
| · α-半乳糖苷酶与豆粕饲料 | 第15-16
页 |
| · α-半乳糖苷酶与制糖工业 | 第16
页 |
| · α-半乳糖苷酶与化学工业 | 第16-17
页 |
| · α-半乳糖苷酶与血型改造 | 第17
页 |
| · α-半乳糖苷酶与食品工业 | 第17
页 |
| · MEL1基因的研究进展 | 第17-20
页 |
| · MEL1基因的特点 | 第17-18
页 |
| · 蛋白序列结构特点 | 第18-19
页 |
| · MEL基因家族 | 第19
页 |
| · MEL1基因在酵母双杂交系统中的应用 | 第19-20
页 |
| · 酿酒酵母表达系统 | 第20-22
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| · 用于基因表达的宿主菌-酿酒酵母 | 第20
页 |
| · 用于酵母基因表达的两类载体 | 第20-21
页 |
| · YIp(yeast integration plasmid)型载体 | 第20-21
页 |
| · YEp(yeast episomal plasmid)型载体 | 第21
页 |
| · 酿酒酵母基因表达系统研究现状及其优缺点 | 第21-22
页 |
| · 大肠杆菌表达系统 | 第22-24
页 |
| · 表达载体 | 第22-23
页 |
| · 研究进展 | 第23-24
页 |
| · 毕赤酵母表达系统 | 第24-27
页 |
| · 毕赤酵母表达宿主菌 | 第24
页 |
| · 常用载体及其特点 | 第24-25
页 |
| · 载体的整合 | 第25-26
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| · 外源蛋白翻译后修饰 | 第26
页 |
| · 展望 | 第26-27
页 |
| · 问题的提出 | 第27-28
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| · 课题研究的来源、意义与目标 | 第28-29
页 |
| 第二章 a-半乳糖苷酶组成型表达基因在酿酒酵母中的表达 | 第29-40
页 |
| · 材料和方法 | 第29-35
页 |
| · 材料 | 第29-30
页 |
| · 质粒与菌株 | 第29-30
页 |
| · 培养基 | 第30
页 |
| · 主要试剂 | 第30
页 |
| · PCR引物设计 | 第30
页 |
| · 方法 | 第30-35
页 |
| · 酵母基因组DNA的提取 | 第30-31
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳 | 第31
页 |
| · MEL1基因的扩增及T-A克隆 | 第31-32
页 |
| · PCR产物的纯化 | 第32
页 |
| · 连接反应 | 第32
页 |
| · 大肠杆菌转化 | 第32-33
页 |
| · 质粒DNA的提取 | 第33
页 |
| · 酶切鉴定 | 第33-34
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL的构建及筛选 | 第34
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL转化宿主酵母 | 第34-35
页 |
| · 结果与分析 | 第35-38
页 |
| · 载体构建 | 第35-36
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| · 酵母基因组DNA的提取 | 第36-37
页 |
| · MEL1基因的克隆与测序 | 第37
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL的构建及筛选 | 第37-38
页 |
| · pGAD-Gal重组载体连接部分 | 第38
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL转化酵母 | 第38
页 |
| · 讨论 | 第38-40
页 |
| 第三章 α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中的表达 | 第40-49
页 |
| · 材料和方法 | 第40-43
页 |
| · 材料 | 第40-41
页 |
| · 方法 | 第41-43
页 |
| · 酵母基因组DNA的提取 | 第41
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| · MEL1基因的扩增 | 第41
页 |
| · 目的基因的酶切 | 第41
页 |
| · 表达载体pRSET的酶切 | 第41-42
页 |
| · 目的片段与载体的连接与转化 | 第42
页 |
| · 阳性克隆的筛选 | 第42
页 |
| · 重组质粒的转化 | 第42
页 |
| · 诱导表达 | 第42-43
页 |
| · 结果与分析 | 第43-47
页 |
| · 载体构建 | 第43-44
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| · 酵母基因组DNA的提取结果 | 第44-45
页 |
| · MEL1基因的扩增 | 第45
页 |
| · 表达载体pRSET的酶切 | 第45
页 |
| · 阳性克隆的筛选 | 第45-46
页 |
| · pRSET-Gal重组载体连接部分 | 第46
页 |
| · 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第46-47
页 |
| · 表达产物的活性检测 | 第47
页 |
| · 讨论 | 第47-49
页 |
| 第四章 α-半乳糖苷酶基因MEL1在毕赤酵母中的组成型表达 | 第49-61
页 |
| · 材料和方法 | 第49-52
页 |
| · 材料与试剂 | 第49-50
页 |
| · 菌株及质粒 | 第49-50
页 |
| · 培养基 | 第50
页 |
| · 主要试剂 | 第50
页 |
| · 方法 | 第50-52
页 |
| · 酵母基因组DNA的提取 | 第50
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| · 质粒pGAPZ α A的制备 | 第50
页 |
| · PCR引物设计 | 第50
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| · MEL1基因的扩增及T-A克隆 | 第50-51
页 |
| · 重组质粒pGAPZ α-GAL的构建及筛选 | 第51
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL转化宿主酵母KM71及鉴定 | 第51-52
页 |
| · α-半乳糖苷酶的表达分析 | 第52
页 |
| · α-半乳糖苷酶的酶活测定 | 第52
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| · 结果与分析 | 第52-59
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| · 载体构建 | 第52-53
页 |
| · 酵母基因组DNA的提取 | 第53-54
页 |
| · 质粒pGAPZ α A的制备 | 第54
页 |
| · MEL1基因的克隆 | 第54-55
页 |
| · 重组质粒pGAPZ α-GAL的构建及筛选 | 第55-56
页 |
| · pGAPZ α-Gal重组载体连接部分 | 第56
页 |
| · 重组质粒pGAD-GAL转化酵母 | 第56-57
页 |
| · 制作标准曲线 | 第57-58
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| · α-半乳糖苷酶的表达分析 | 第58-59
页 |
| · 讨论 | 第59-61
页 |
| 第五章 总结 | 第61-62
页 |
| 参考文献 | 第62-71
页 |
| 附录A.缩略词表 | 第71-72
页 |
| 附录B.主要试剂配制 | 第72-76
页 |
| 附录C.MEL1基因序列 | 第76-79
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| 附录D.MEL1测序报告 | 第79-82
页 |
| 致谢 | 第82-83
页 |
| 作者简介 | 第83
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