论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6
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| ABSTRACT | 第6-14
页 |
| 文献综述 | 第14-30
页 |
| 第一章 A 型流感病毒的反向遗传操作技术及运用 | 第14-30
页 |
| · A 型流感病毒及其基因组特征 | 第14-15
页 |
| · 流感病毒的复制 | 第15-18
页 |
| · 吸附、穿膜和脱壳 | 第16
页 |
| · 基因组的转录与复制 | 第16
页 |
| · 病毒蛋白的合成 | 第16-17
页 |
| · 病毒粒子的装配 | 第17
页 |
| · 病毒的出芽和释放 | 第17-18
页 |
| · 流感病毒反向遗传操作技术体系的建立 | 第18-24
页 |
| · 流感病毒功能性RNPS 的建立 | 第18-19
页 |
| · 以辅助流感病毒为基础的反向遗传操作系统 | 第19-21
页 |
| · 完全以克隆的 cDNA 为基础的反向遗传操作系统 | 第21-24
页 |
| · 流感病毒反向遗传操作技术的应用 | 第24-28
页 |
| · 研究流感病毒基因产物及其对病毒的生活周期与致病性的作用 | 第25-27
页 |
| · 用流感病毒作为载体系统表达外源基因 | 第27-28
页 |
| · 研制经基因修饰的疫苗候选株 | 第28
页 |
| · 结束语 | 第28-30
页 |
| 研究内容 | 第30-58
页 |
| 第二章 MDV-A 6 个内部骨架基因双向转录/表达重组质粒的构建与验证 | 第30-42
页 |
| · 材料 | 第31-32
页 |
| · 病毒、鸡胚、细胞和菌种 | 第31
页 |
| · 8 质粒病毒拯救系统 | 第31-32
页 |
| · 主要试剂 | 第32
页 |
| · 主要仪器 | 第32
页 |
| · 分子生物学分析软件 | 第32
页 |
| · 常用溶液的配置 | 第32
页 |
| · 方法 | 第32-39
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第32-33
页 |
| · 双向转录表达载体PAD3000 的构建策略及构建 | 第33
页 |
| · 转录表达载体的工作原理 | 第33-35
页 |
| · 转录/表达载体构建:克隆流感病毒各片段CDNA 到PAD3000 的策略 | 第35
页 |
| · 建立流感病毒反向遗传操作技术的路线 | 第35
页 |
| · 双向转录表达载体PAD3000 的构建 | 第35-37
页 |
| · MDV-A 6 个内部基因片段重组质粒的构建 | 第37-38
页 |
| · 6 个内部质粒序列分析 | 第38
页 |
| · 质粒的重组 | 第38
页 |
| · 共转染 | 第38-39
页 |
| · 结果 | 第39-40
页 |
| · 双向转录表达载体PAD3000 的构建 | 第39
页 |
| · MDV-A 6 个内部基因片段重组质粒的构建及基因分析 | 第39
页 |
| · 7+1 病毒拯救 | 第39-40
页 |
| · 讨论 | 第40-41
页 |
| · 结论 | 第41-42
页 |
| 第三章 冷适应减毒的重配A 型流感病毒RMDV-A 的拯救及部分生物学特性的鉴定 | 第42-50
页 |
| · 材料 | 第43
页 |
| · 细胞、鸡胚和血清 | 第43
页 |
| · 8 质粒病毒拯救系统 | 第43
页 |
| · 主要试剂 | 第43
页 |
| · 方法 | 第43-44
页 |
| · 引物合成与设计 | 第43
页 |
| · 质粒的提取 | 第43
页 |
| · MDV-A 冷适应株的拯救 | 第43-44
页 |
| · 重配病毒RMDV-A 部分生物学特性的鉴定 | 第44
页 |
| · 结果 | 第44-47
页 |
| · MDV-A 冷适应株的拯救 | 第44-45
页 |
| · RT-PCR 鉴定 | 第45
页 |
| · 电镜观察 | 第45-46
页 |
| · RMDV-A 重配病毒感染MDCK 细胞 | 第46
页 |
| · 重配病毒冷适应表型鉴定 | 第46-47
页 |
| · 讨论 | 第47-49
页 |
| · 用8 质粒系统产生冷适应重配流感病毒RMDV-A | 第47-48
页 |
| · 提高拯救效率应注意的问题 | 第48-49
页 |
| · 结论 | 第49-50
页 |
| 第四章 06～07 A 型流感病毒冷适应疫苗株的拯救 | 第50-58
页 |
| · 材料 | 第51
页 |
| · 病毒、鸡胚、细胞和菌种 | 第51
页 |
| · 8 质粒病毒拯救系统 | 第51
页 |
| · 主要试剂 | 第51
页 |
| · 主要仪器 | 第51
页 |
| · 分子生物学分析软件 | 第51
页 |
| · 方法 | 第51-55
页 |
| · 用于RNA 操作试剂和器材的DEPC 处理 | 第51-52
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第52
页 |
| · 病毒基因组RNA 的提取 | 第52
页 |
| · 反转录（RT）病毒全基因组 | 第52
页 |
| · 聚合酶链反应（PCR）扩增病毒HA 和NA 基因 | 第52-53
页 |
| · 目的片段的回收 | 第53
页 |
| · 目的片段与T 载体的连接 | 第53
页 |
| · 连接产物的转化 | 第53
页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第53
页 |
| · 重组双向转录/表达质粒的构建 | 第53-54
页 |
| · 单一基因片段的功能验证 | 第54
页 |
| · 06～07 流感病毒冷适应株的拯救 | 第54
页 |
| · 重配病毒RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 的初步鉴定 | 第54-55
页 |
| · 结果 | 第55-57
页 |
| · HA﹑NA 基因RT-PCR | 第55
页 |
| · 重组质粒酶切鉴定 | 第55
页 |
| · 7+1 病毒拯救 | 第55-56
页 |
| · RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 冷适应株的拯救 | 第56-57
页 |
| · RMDV-A-H1、RMDV-A-H3 RT- PCR 测序鉴定 | 第57
页 |
| · 讨论 | 第57
页 |
| · 结论 | 第57-58
页 |
| 结论 | 第58-60
页 |
| 参考文献 | 第60-68
页 |
| 附录（缩略语） | 第68-70
页 |
| 致谢 | 第70-72
页 |
| 个人简介 | 第72
页 |
