论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6
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| ABSTRACT | 第6-9
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| 第一章 文章综述 | 第9-19
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| · TILLING 技术研究进展 | 第9-12
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| · 单链特异的核酸内切酶研究进展 | 第12-14
页 |
| · 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第14-17
页 |
| · 立题依据 | 第17-19
页 |
| 第二章 芹菜CELI 酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第19-34
页 |
| · 材料 | 第19
页 |
| · 载体和菌株 | 第19
页 |
| · 主要试剂 | 第19
页 |
| · 引物 | 第19
页 |
| · 方法 | 第19-27
页 |
| · 芹菜中CEL I 基因的克隆 | 第19-21
页 |
| · 表达载体构建及鉴定 | 第21-23
页 |
| · pPIC9K-CELI 表达载体构建 | 第23
页 |
| · pPICZαB-CELI 表达载体构建 | 第23
页 |
| · 电转化及重组酵母菌的筛选 | 第23-25
页 |
| · 重组载体的线性化 | 第23-24
页 |
| · 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第24-25
页 |
| · 毕赤酵母转化子的筛选及Mut 表型鉴定 | 第25
页 |
| · 重组菌的基因组DNA 的PCR 鉴定 | 第25
页 |
| · 目的基因的诱导表达 | 第25-26
页 |
| · 诱导表达蛋白的SDS-PAGE 电泳分析及 Western Blotting 鉴定 | 第26-27
页 |
| · 目的蛋白的纯化及活性鉴定 | 第27
页 |
| · 结果与分析 | 第27-32
页 |
| · 芹菜中CEL I 基因的克隆 | 第27-28
页 |
| · 芹菜总RNA 的提取 | 第27
页 |
| · CEL I 基因的克隆 | 第27-28
页 |
| · 表达载体的构建及序列分析 | 第28-29
页 |
| · 表达载体pPIC9K-CELI 的构建结果 | 第28-29
页 |
| · 表达载体pPICZαB-CELI 的构建结果 | 第29
页 |
| · 重组酵母菌落中目的基因的 PCR 鉴定 | 第29-30
页 |
| · 诱导表达的蛋白电泳结果 | 第30-31
页 |
| · Western Blotting 鉴定结果分析 | 第31-32
页 |
| · 结果与讨论 | 第32-34
页 |
| 第三章 芹菜中CEL I 酶的提取及其在筛选大豆疫霉突变体库中 PsPMA1 基因突变体的应用 | 第34-39
页 |
| · 芹菜中CEL I 酶的粗提取及活性分析 | 第34-36
页 |
| · 实验材料 | 第34
页 |
| · 芹菜中CEL I 酶的粗提取方法 | 第34
页 |
| · 芹菜中的CEL I 酶的SDS-PAGE 检测 | 第34
页 |
| · 含错配的异源杂合双链DNA 的形成 | 第34-36
页 |
| · CEL I 酶粗提液的活性检测 | 第36
页 |
| · CEL I 酶在筛选大豆疫霉突变体库中PsPMA1 基因突变体的应用 | 第36-37
页 |
| · 结果与分析 | 第37-38
页 |
| · CEL I 酶粗提液的活性检测结果 | 第37-38
页 |
| · CEL I 酶应用于 PsPMA1 基因突变体筛选的初步结果 | 第38
页 |
| · 结果与讨论 | 第38-39
页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第39-40
页 |
| · 结论 | 第39
页 |
| · 创新点 | 第39-40
页 |
| 参考文献 | 第40-44
页 |
| 附录 | 第44-48
页 |
| 致谢 | 第48-49
页 |
| 作者简介 | 第49
页 |
