论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-11
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| 英文摘要 | 第11-13
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| 引言 | 第13-41
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| 1 犬瘟热研究概况 | 第13-21
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| · 病原 | 第13-14
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| · 致病机理 | 第14-15
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| · 流行病学 | 第15-17
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| · 临床症状 | 第17
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| · 病理变化 | 第17-18
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| · 诊断学 | 第18-19
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| · 防治 | 第19-21
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| 2 犬瘟热病毒分子生物学特征 | 第21-29
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| · 形态学和基因特征 | 第21
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| · 病毒蛋白 | 第21-27
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| · 前导序列及其调控序列 | 第22
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| · 核衣壳蛋白(N)蛋白及其基因 | 第22-24
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| · 磷(P)蛋白及其基因 | 第24
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| · 基质膜(M)蛋白及其基因 | 第24
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| · 大(L)蛋白及其基因 | 第24
页 |
| · 融合(F)蛋白及其基因 | 第24-25
页 |
| · 附着或血凝(H)蛋白及其基因 | 第25-27
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| · 抗原变异性 | 第27-29
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| 3 实时荧光定量PCR 研究进展 | 第29-41
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| · 实时定量 PCR 原理 | 第29-30
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| · 实时定量 PCR 分类 | 第30-33
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| · 非探针类 | 第30-31
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| · 探针类 | 第31-32
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| · Amplisensor 技术 | 第32
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| · 分子信标 | 第32
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| · LightCycler | 第32-33
页 |
| · 复合探针法 | 第33
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| · 实时荧光定量 PCR 的特点及优点 | 第33
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| · 实时荧光定量 PCR 的应用 | 第33-36
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| · 核酸浓度的定量 | 第33-34
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| · 环境检测 | 第34
页 |
| · 转基因生物中的应用 | 第34
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| · 基因转录的检测 | 第34
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| · 生物分类和植物病原物检测 | 第34-35
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| · 医学应用 | 第35-36
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| · 在兽医学研究领域的应用 | 第36-39
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| · 在细菌病诊断中的应用 | 第37
页 |
| · 在病毒病诊断中的应用 | 第37-38
页 |
| · 在寄生虫病诊断中的应用 | 第38
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| · 在其他方面的应用 | 第38-39
页 |
| · 实时荧光定量 PCR 的展望 | 第39-41
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| 实验一 CDV-FOX-TA H、F和N基因的克隆与序列分析 | 第41-56
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| 1 材料与方法 | 第41-47
页 |
| · 病毒 | 第41
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| · 主要试剂与仪器 | 第41-42
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| · 引物的设计与合成 | 第42-43
页 |
| · 常规DNA 操作技术 | 第43-46
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| · 大肠杆菌感受态的制备 | 第43
页 |
| · 连接物的转化 | 第43-44
页 |
| · 转化菌落的快速鉴定 | 第44
页 |
| · 重组子的酶切筛选与鉴定 | 第44
页 |
| · 质粒的小量制备 | 第44-45
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| · DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第45
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| · 目的片段回收 | 第45
页 |
| · 外源DNA 片段与质粒载体的连接反应 | 第45
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| · 限制性内切酶水解反应 | 第45-46
页 |
| · 病毒总RNA 的提取 | 第46
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| · RT-PCR | 第46
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| · H、F 和 N 基因的克隆与序列分析 | 第46-47
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| 2 结果 | 第47-52
页 |
| · RT-PCR 扩增结果 | 第47-48
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| · CDV-FOX-TA H、F 和N 基因重组质粒的鉴定 | 第48-50
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| · 同源性分析及系统发生树的构建 | 第50-52
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| 3 讨论 | 第52-56
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| 实验二 TaqMan荧光定量RT-PCR检测CDV方法的建立与初步应用 | 第56-67
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| 1 材料与方法 | 第56-60
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| · 材料 | 第56-57
页 |
| · 方法 | 第57-60
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| · 引物的设计与合成 | 第57-58
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| · CDV 总RNA 的提取 | 第58
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| · 反转录及其反应条件的优化 | 第58
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| · RT-PCR 反应体系的建立及反应条件的优化 | 第58
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 标准阳性模板的制备 | 第58-59
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 反应体系的建立及反应条件的优化 | 第59
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法特异性试验 | 第59
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法敏感性试验 | 第59-60
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 方法重复性试验及标准曲线的建立 | 第60
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| · 犬瘟热病毒 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测方法的初步应用 | 第60
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| 2 结果 | 第60-65
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| · 反转录反应条件的优化结果 | 第60
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| · RT-PCR 反应体系与反应条件 | 第60
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| · TaqMan 荧光定量 RT-PCR 反应体系及反应条件 | 第60
页 |
| · 特异性试验结果 | 第60-61
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| · 敏感性实验结果 | 第61-62
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| · 重复性试验结果与标准曲线 | 第62-63
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| · 犬瘟热病毒 TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测方法的初步应用结果 | 第63-65
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| 3 讨论 | 第65-67
页 |
| 结论 | 第67-68
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| 参考文献 | 第68-77
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| 致谢 | 第77-78
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| 个人简历 | 第78
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| 攻读硕士期间发表的部分论文 | 第78-79
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| 附录 | 第79-82
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