论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| · 羰基还原酶概述 | 第10页 |
| · 羰基还原酶在不对称合成手性化合物上的应用 | 第10-12页 |
| · 手性醇类化合物 | 第10-11页 |
| · 羰基还原酶不对称还原制备手性醇类化合物 | 第11页 |
| · 羰基还原酶在不对称还原反应上的特点 | 第11-12页 |
| · 开发不对称还原反应的新型生物催化剂的研究进展 | 第12-13页 |
| · 羰基还原酶基因克隆及表达 | 第13-15页 |
| · 羰基还原酶基因克隆 | 第13-14页 |
| · 表达系统 | 第14页 |
| · 利用基因工程重组菌合成手性化合物 | 第14-15页 |
| · 全细胞辅酶再生的策略 | 第15-16页 |
| · 酶分子催化中的关键氨基酸位点 | 第16-17页 |
| · 论文的研究内容 | 第17-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-30页 |
| · 实验材料 | 第20-22页 |
| · 菌株与质粒 | 第20页 |
| · 主要试剂 | 第20-21页 |
| · 培养基与溶液 | 第21-22页 |
| · 主要仪器 | 第22页 |
| · 实验方法 | 第22-30页 |
| · 大肠杆菌原核表达系统的构建 | 第22-25页 |
| · 毕赤酵母（P. pastoris）真核表达系统的构建 | 第25-26页 |
| · 共表达毕赤酵母（P. pastoris）系统的构建 | 第26页 |
| · 重组蛋白的分离纯化及酶学性质的确定 | 第26-28页 |
| · 重组菌全细胞不对称还原反应 | 第28页 |
| · SCRⅡ酶分子的分子改造 | 第28-29页 |
| · 动力学分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-53页 |
| · 新型(S)-羰基还原酶基因scrⅡ及氨基酸序列的分析 | 第30-31页 |
| · 基因scrⅡ的序列 | 第30页 |
| · (S)-羰基还原酶SCRⅡ的氨基酸序列分析 | 第30-31页 |
| · (S)-羰基还原酶在大肠杆菌中的克隆表达及重组菌的不对称转化 | 第31-36页 |
| · 基因scrⅡ的PCR 扩增 | 第31页 |
| · 克隆质粒T-scrⅡ的构建与酶切鉴定 | 第31页 |
| · 表达质粒pET28a- scrⅡ的构建与酶切鉴定 | 第31-32页 |
| · 重组蛋白的IPTG 诱导表达 | 第32-33页 |
| · 重组大肠杆菌不对称生物转化 | 第33-34页 |
| · 诱导剂IPTG 浓度对重组蛋白表达的影响 | 第34页 |
| · 诱导温度对蛋白表达量及重组菌不对称转化的影响 | 第34-35页 |
| · pH 值对重组菌转化反应的影响 | 第35-36页 |
| · 温度对重组菌转化反应的影响 | 第36页 |
| · 重组蛋白EcSCRⅡ的分离纯化及其酶学性质的鉴定 | 第36-40页 |
| · 表达于大肠杆菌的目标蛋白的纯化及其生物功能的验证 | 第36-37页 |
| · 酶反应的最适pH 及pH 稳定性的研究 | 第37页 |
| · 酶反应的最适温度及温度稳定性的研究 | 第37-39页 |
| · 金属离子对酶活的影响 | 第39页 |
| · 酶的底物选择性 | 第39-40页 |
| · 酶蛋白在不对称还原反应中的关键氨基酸位点的初步探讨 | 第40-44页 |
| · 序列和结构分析确定突变位点 | 第40-41页 |
| · SOE-PCR 方法进行定点突变及突变子的表达 | 第41-43页 |
| · 突变酶的比活及不对称还原反应 | 第43页 |
| · 突变酶不对称还原2-羟基苯乙酮的动力学研究 | 第43-44页 |
| · SCRⅡ在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达及重组菌的不对称转化 | 第44-48页 |
| · 表达质粒P. pastoris/pPIC3.5K-scrⅡ的构建及鉴定 | 第44页 |
| · 电转化毕赤酵母GS 115 | 第44-45页 |
| · 重组毕赤酵母阳性克隆的筛选及鉴定 | 第45页 |
| · SCRⅡ在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第45页 |
| · 表达产物SDS-PAGE 分析 | 第45-46页 |
| · 重组毕赤酵母P. pastoris | 第46页 |
| · 重组菌不对称还原2-羟基苯乙酮的批次反应 | 第46-48页 |
| · SCRⅡ与G6PDH 在毕赤酵母中的共表达 | 第48-53页 |
| · ZWF1 基因序列 | 第48页 |
| · 表达质粒pPICZα-ZWF1 的构建 | 第48-49页 |
| · 毕赤酵母P. pastoris/SCRⅡG 的构建 | 第49页 |
| · SCRⅡ和G6PDH 在毕赤酵母中的共表达 | 第49-50页 |
| · 全细胞催化剂的不对称转化反应 | 第50-51页 |
| · 两种重组毕赤酵母不对称还原2-羟基苯乙酮的批次反应 | 第51-53页 |
| 主要结论和展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-61
页 |
