论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 围产期奶牛脂肪肝病的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 围产期奶牛脂肪肝病的病因学 | 第13页 |
| 1.1.2 非酯化脂肪酸在围产期奶牛脂肪肝病中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 围产期奶牛脂肪肝病的检测和诊断 | 第14-15页 |
| 1.2 脂肪酸从头合成因子在脂质代谢过程中的作用 | 第15-16页 |
| 1.3 NF-κB信号通路对脂肪酸从头合成的影响 | 第16-17页 |
| 1.4 Orai1 通路在脂肪酸从头合成过程中的参与作用 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 犊牛原代肝细胞的分离与纯化 | 第20-22页 |
| 2.2.1 实验前准备与相关试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2.2 犊牛肝脏的采集 | 第21页 |
| 2.2.3 犊牛原代肝细胞的分离与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 犊牛原代肝细胞的培养 | 第22页 |
| 2.3 犊牛原代肝细胞分组与处理 | 第22-23页 |
| 2.3.1 添加NEFAs检测Ca~(2+)浓度细胞处理实验 | 第22-23页 |
| 2.3.2 Orai1 通路沉默对犊牛原代肝细胞脂肪酸从头合成影响细胞处理实验 | 第23页 |
| 2.3.3 添加NEFAs检测犊牛原代肝细胞脂肪酸从头合成细胞处理实验 | 第23页 |
| 2.4 流式细胞术检测犊牛原代肝细胞Ca~(2+)浓度 | 第23-24页 |
| 2.5 脂滴荧光染色检测NEFAs对犊牛原代肝细胞脂滴生成的影响 | 第24页 |
| 2.6 引物设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.7 QRT-PCR检测犊牛原代肝细胞基因表达水平 | 第25-26页 |
| 2.7.1 犊牛原代肝细胞细胞总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.7.2 犊牛原代肝细胞总RNA反转录成c DNA | 第25页 |
| 2.7.3 QRT-PCR技术检测犊牛原代肝细胞中NF-κB p65、Orai1、Srebp-1c、Acc1和Fas的mRNA表达水平 | 第25-26页 |
| 2.8 Western Blot检测犊牛原代肝细胞蛋白表达水平 | 第26-29页 |
| 2.8.1 犊牛原代肝细胞总蛋白的提取与测定 | 第26-27页 |
| 2.8.2 蛋白免疫印迹(Western Blot)测定犊牛原代肝细胞中NF-κB p65、ORAI1、SREBP-1、ACC1、FAS的蛋白表达水平 | 第27-29页 |
| 2.9 统计学分析 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 3.1 犊牛原代肝细胞发生肝脂沉积时细胞内Ca~(2+)浓度的差异变化 | 第31-32页 |
| 3.2 沉默Orai1 信号通路后犊牛原代肝细胞脂肪酸从头合成调控因子mRNA与蛋白表达水平的差异变化 | 第32-33页 |
| 3.3 犊牛原代肝细胞发生肝脂肪沉积时脂滴生成水平的变化 | 第33-35页 |
| 3.4 犊牛原代肝细胞发生肝脂沉积时脂肪酸从头合成调控因子mRNA和蛋白表达水平的差异变化 | 第35-39页 |
| 4 讨论 | 第39-43页 |
| 4.1 Ca~(2+)对围产期奶牛脂肪酸从头合成的促进作用 | 第39页 |
| 4.2 NF-κB信号通路对围产期奶牛脂肪酸从头合成的促进作用 | 第39-41页 |
| 4.3 Orai1 信号通路对围产期奶牛脂肪酸从头合成的促进作用 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-55页 |
| 致谢 | 第55-57页 |
| 个人简历 | 第57页 |
