论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
页 |
| ABSTRACT | 第7-8
页 |
| 英文缩写对照表 | 第8-12
页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23
页 |
| · 概述 | 第12
页 |
| · RNA 干扰机制研究发展及在肿瘤基因治疗中的应用 | 第12-15
页 |
| · RNAi 作用机制 | 第12-14
页 |
| · RNAi 的特征 | 第14
页 |
| · RNAi 在肿瘤基因治疗中的运用 | 第14-15
页 |
| · SATB1 的特性 | 第15-18
页 |
| · SATB1 的主要生物学功能 | 第16-17
页 |
| · SATB1 基因重排促进乳腺癌的生长和转移 | 第17-18
页 |
| · 腺相关病毒载体介导的基因治疗研究现状 | 第18-21
页 |
| · 基因治疗研究概况 | 第18-19
页 |
| · 腺相关病毒载体 | 第19-21
页 |
| · 本论文的研究目的和意义 | 第21-22
页 |
| · 本论文的技术路线 | 第22-23
页 |
| 第二章以 SATB1 为靶标的小分子 RNA 抑制效果的评估 | 第23-44
页 |
| · 实验材料 | 第23-31
页 |
| · 质粒、菌株与细胞系 | 第23
页 |
| · 主要试剂和药品 | 第23-25
页 |
| · 主要设备与仪器 | 第25-26
页 |
| · 溶液配制 | 第26-31
页 |
| · 实验方法 | 第31-37
页 |
| · 转染质粒的大量制备 | 第31-32
页 |
| · MDA-MB-231 细胞的培养 | 第32-33
页 |
| · 细胞转染（脂质体法） | 第33
页 |
| · 转染后细胞总 RNA 的提取（Trizol 抽提法） | 第33-34
页 |
| · Real Time-PCR 试验(SYBR Green Assay)检测siRNA 抑制效果 | 第34-36
页 |
| · Western Blot 实验检测siRNA 抑制效果 | 第36-37
页 |
| · 实验结果与讨论 | 第37-42
页 |
| · 质粒大量提取的电泳鉴定 | 第37-38
页 |
| · MDA-MB-231 细胞培养结果 | 第38
页 |
| · Real Time-PCR 在mRNA 水平检测satb1 基因表达量抑制效果 | 第38-41
页 |
| · Western Blot 在蛋白质水平检测satb1 基因表达量抑制效果 | 第41-42
页 |
| · 小结 | 第42-44
页 |
| 第三章 靶向 SATB1 和 VEGF的双重 siRNA重组腺相关病毒载体的构建 | 第44-59
页 |
| · 实验材料 | 第44-48
页 |
| · 质粒和菌株 | 第44
页 |
| · 主要药品与试剂 | 第44-45
页 |
| · 主要设备与仪器 | 第45-46
页 |
| · 溶液配制 | 第46-48
页 |
| · 实验方法 | 第48-56
页 |
| · 目的片段的 T 载体克隆 | 第50-53
页 |
| · 重组 T 载体的转化 | 第53-54
页 |
| · 重组 T 载体的鉴定 | 第54
页 |
| · pAAV-VESR 的构建 | 第54-56
页 |
| · 结果与讨论 | 第56-58
页 |
| · PCR 产物回收后鉴定 | 第56
页 |
| · pAAV-VESR 的酶切鉴定 | 第56-58
页 |
| · 重组腺相关病毒载体pAAV-VESR 的测序结果 | 第58
页 |
| · 小结 | 第58-59
页 |
| 第四章 重组腺相关病毒的组装及病毒介导的外源基因表达 | 第59-70
页 |
| · 实验材料 | 第59-60
页 |
| · 质粒与细胞 | 第59
页 |
| · 主要药品与耗材 | 第59
页 |
| · 主要设备与仪器 | 第59-60
页 |
| · 溶液配制 | 第60
页 |
| · 实验方法 | 第60-63
页 |
| · 质粒的大量制备 | 第60-61
页 |
| · AAV-293 细胞的培养 | 第61-62
页 |
| · 重组病毒的组装 | 第62
页 |
| · 重组病毒的收集 | 第62-63
页 |
| · Real Time-PCR 方法检测重组病毒介导的外源基因表达 | 第63
页 |
| · 结果与讨论 | 第63-68
页 |
| · 质粒大量提取的电泳鉴定 | 第63-64
页 |
| · AAV-293 细胞培养结果 | 第64
页 |
| · 重组病毒组装结果 | 第64-65
页 |
| · Real Time-PCR 检测外源基因表达 | 第65-68
页 |
| · 小结 | 第68-70
页 |
| 结论与展望 | 第70-72
页 |
| 结论 | 第70
页 |
| 本论文的创新性 | 第70-71
页 |
| 展望 | 第71-72
页 |
| 参考文献 | 第72-76
页 |
| 附录 | 第76-77
页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78
页 |
| 致谢 | 第78页 |
