论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第13-39页 |
| 1 PCV2分子生物学特性 | 第13-17页 |
| · 病毒的形态学及理化特性 | 第13-14页 |
| · PCV2的培养特性 | 第14页 |
| · 基因组结构及编码蛋白 | 第14-17页 |
| · Rep蛋白 | 第15页 |
| · Cap蛋白 | 第15-16页 |
| · ORF3编码蛋白 | 第16-17页 |
| 2 诊断技术 | 第17-21页 |
| · 病毒分离和鉴定 | 第17页 |
| · 免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) | 第17页 |
| · 间接免疫荧光法(IFA) | 第17-18页 |
| · 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) | 第18页 |
| · 原位杂交(in situ hybridization,ISH) | 第18页 |
| · 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第18-20页 |
| · 常规PCR | 第18页 |
| · 复合PCR(Multiplex PCR,mPCR) | 第18-19页 |
| · 套式PCR | 第19页 |
| · 竞争PCR | 第19页 |
| · 实时荧光定量PCR | 第19-20页 |
| · PCR产物限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) | 第20页 |
| · 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第20-21页 |
| · 竞争ELISA | 第20页 |
| · 间接ELISA | 第20-21页 |
| · 抗原捕获ELISA(Antigen-capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) | 第21页 |
| 3 疫苗 | 第21-29页 |
| · 疫苗种类 | 第21-23页 |
| · 灭活苗 | 第21页 |
| · 弱毒活疫苗 | 第21-22页 |
| · 亚单位疫苗 | 第22页 |
| · 重组活载体疫苗 | 第22页 |
| · 基因疫苗 | 第22-23页 |
| · PCV2疫苗的应用及效果 | 第23-29页 |
| · 免疫方法 | 第24页 |
| · 免疫的影响因素 | 第24-25页 |
| · 免疫效果 | 第25-27页 |
| · PCV2疫苗的临床应用 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-39页 |
| 第二章 昆虫杆状病毒高效表达PCV2 CAP蛋白的基因分子设计 | 第39-63页 |
| 摘要 | 第39-40页 |
| 1 材料与方法 | 第40-50页 |
| · 材料 | 第40页 |
| · 方法 | 第40-50页 |
| · PCV2 Cap基因片段克隆引物设计和合成 | 第40-43页 |
| · 目的基因片段的扩增 | 第43页 |
| · PCR产物的克隆 | 第43-46页 |
| · 重组Bacmid的构建与鉴定 | 第46-48页 |
| · 重组杆状病毒的获得与扩增 | 第48页 |
| · 重组Cap蛋白在Sf9细胞中的表达与Western Blot鉴定 | 第48-49页 |
| · 间接免疫荧光鉴定(IFA) | 第49页 |
| · 病毒样颗粒(VLP)的形成 | 第49-50页 |
| · 双抗体夹心ELISA的测定 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-58页 |
| · 目的基因的获取 | 第50-51页 |
| · 重组供体质粒的构建与鉴定 | 第51-52页 |
| · 重组Bacmid的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| · 重组杆状病毒的获得 | 第53-54页 |
| · 重组cap蛋白的SDS-PAGE分析和Western blot鉴定 | 第54-55页 |
| · 重组cap蛋白的IFA鉴定 | 第55-56页 |
| · 重组Cap蛋白的夹心ELISA测定 | 第56-57页 |
| · 电镜观察VLP的形成 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| ABSTRACT | 第61-63页 |
| 第三章 表达PCV2 CAP蛋白的昆虫细胞系的建立和鉴定 | 第63-75页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| · 试验材料 | 第64页 |
| · PCV2 cap基因的引物设计 | 第64页 |
| · cap基因的PCR扩增 | 第64页 |
| · 重组表达载体的构建 | 第64-66页 |
| · PCR产物的回收和纯化 | 第64页 |
| · PCR产物酶切与纯化 | 第64-65页 |
| · pMIB-V5/HisA载体的酶切与纯化 | 第65页 |
| · 目的基因克隆入pMIB-V5/HisA载体 | 第65-66页 |
| · DH5a感受态的制备与转化 | 第66页 |
| · 重组质粒的小量提取 | 第66页 |
| · 重组质粒的酶切和测序鉴定 | 第66页 |
| · 重组质粒的转染 | 第66页 |
| · 表达PCV2 Cap蛋白的昆虫细胞系的筛选 | 第66-67页 |
| · Western Blot鉴定 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-69页 |
| · cap基因的PCR扩增 | 第67页 |
| · 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第67-68页 |
| · 稳定昆虫细胞系的筛选 | 第68-69页 |
| · 细胞系表达产物的western blot鉴定 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| ABSTRACT | 第73-75页 |
| 第四章 杆状病毒表达的PCV2 CAP蛋白免疫特性研究 | 第75-95页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| 1 材料与方法 | 第76-82页 |
| · 主要材料与试剂 | 第76页 |
| · 实验动物 | 第76页 |
| · 疫苗的制备 | 第76页 |
| · 小鼠免疫试验 | 第76-78页 |
| · 小鼠分组与免疫 | 第76-77页 |
| · ELISA抗体检测 | 第77页 |
| · 中和抗体检测 | 第77-78页 |
| · 淋巴细胞增殖实验 | 第78页 |
| · 仔猪免疫保护试验 | 第78-82页 |
| · ELISA抗体检测 | 第79页 |
| · 中和抗体检测 | 第79页 |
| · 血清和淋巴结PCV2含量测定 | 第79-81页 |
| · 病理学观察 | 第81-82页 |
| · 数据统计分析 | 第82页 |
| 2 结果 | 第82-90页 |
| · 小鼠免疫试验结果 | 第82-84页 |
| · 体液免疫应答 | 第82-84页 |
| · 细胞免疫应答 | 第84页 |
| · 仔猪免疫保护试验结果 | 第84-90页 |
| · 体液免疫应答 | 第84-85页 |
| · 攻毒后仔猪临床表现及体温变化 | 第85-86页 |
| · 攻毒后仔猪体重的变化 | 第86-87页 |
| · 攻毒后仔猪病毒血症检测 | 第87-88页 |
| · 淋巴结组织中病毒测定 | 第88页 |
| · 病理变化观察 | 第88-89页 |
| · 免疫组化 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| ABSTRACT | 第93-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97
页 |
