论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一篇 组蛋白去甲基化酶 Jhd2、JMJD5 的结构生物学研究 | 第10-55页 |
| 第一章 组蛋白去甲基化酶的研究背景 | 第11-21页 |
| · 染色质与组蛋白甲基化修饰 | 第11-12页 |
| · 组蛋白去甲基化与去甲基化酶 | 第12-17页 |
| · 去甲基化酶的类型 | 第13页 |
| · LSD1 的催化机理与结构特征 | 第13-15页 |
| · JHDM 家族去甲基化酶的催化机理与结构特征 | 第15-17页 |
| · Jhd2 和JMJD5 的研究概况 | 第17-21页 |
| · Jhd2 | 第18-20页 |
| · JMJD5 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-31页 |
| · Jhd2-PHD 及JMJD5 截短体的基因克隆与重组质粒构建 | 第21-24页 |
| · 引物设计 | 第21页 |
| · PCR 扩增及片段回收 | 第21-22页 |
| · 双酶切与连接 | 第22-23页 |
| · 转化涂板、菌落PCR 及抽提质粒并做双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| · Jhd2 和JMJD5 截短体的蛋白表达与鉴定 | 第24-25页 |
| · Jhd2 和JMJD5 截短体的蛋白纯化 | 第25-27页 |
| · 两步纯化法- 适用于大部分截短体蛋白 | 第25-26页 |
| · 四步纯化法-适用于MBP-JMJD5(170-C) | 第26-27页 |
| · Jhd2-PHD 及JMJD5 截短体的晶体筛选 | 第27页 |
| · JMJD5 突变体设计及表达纯化 | 第27-31页 |
| · JMJD5 突变体的分子克隆 | 第27-28页 |
| · JMJD5 突变体的表达纯化 | 第28-31页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第31-50页 |
| · 基因克隆及重组质粒构建 | 第31-33页 |
| · 蛋白表达纯化与鉴定 | 第33-44页 |
| · Jhd2-PHD 截短体的纯化 | 第34-38页 |
| · JMJD5 截短体的表达与纯化 | 第38-44页 |
| · Jhd2 和JMJD5 的晶体初筛 | 第44-46页 |
| · JMJD5 及突变体的克隆与表达纯化 | 第46-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 第二篇 金黄色葡萄球菌 HssS、HssR 的克隆表达纯化 | 第55-83页 |
| 第一章 综述HssS/HssR 的研究背景 | 第57-63页 |
| · 概述 | 第57-58页 |
| · HssRS/HrtAB 系统 | 第58-63页 |
| · HssRS/HrtAB 的研究进展 | 第58页 |
| · 组氨酸激酶的结构研究 | 第58-59页 |
| · 研究展望 | 第59-63页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第63-69页 |
| · HssS 截短体和HssR 全长重组质粒的构建 | 第63-67页 |
| · 引物设计和PCR | 第63-64页 |
| · PCR 及回收目的片段 | 第64-65页 |
| · 双酶切与连接 | 第65页 |
| · 转化涂板、菌落PCR 及抽提质粒并做双酶切鉴定 | 第65-67页 |
| · HssS 截短体和HssR 全长的表达纯化与结晶 | 第67-68页 |
| · HssS 截短体和HssR 全长的诱导表达与鉴定 | 第67页 |
| · HssS 截短体和HssR 的纯化与结晶 | 第67-68页 |
| · HssS 截短体与HssR 的Pull-Down 实验与复合物晶体筛选 | 第68-69页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第69-79页 |
| · 基因克隆及重组质粒构建 | 第69-70页 |
| · 蛋白表达纯化与结晶 | 第70-77页 |
| · HssR 及HssS 截短体的诱导表达与鉴定 | 第70-71页 |
| · HssS 截短体和HssR 的纯化与结晶 | 第71-77页 |
| · Pull-Down 实验及HssS/HssR 复合物结晶筛选 | 第77-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 附录 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
