ubi-1启动子驱动的花生芪合酶基因植物表达载体的构建及玉米遗传转化研究 |
论文目录 | | | 缩略语表 | 第1-6
页 | | 摘要 | 第6-8
页 | | Abstract | 第8-10
页 | | Ⅰ 前言 | 第10
页 | | Ⅱ 文献综述 | 第10-26
页 | | · 植物抗真菌基因工程研究现状 | 第10-13
页 | | · 抗真菌病基因的克隆 | 第11-13
页 | | · 几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因 | 第11-12
页 | | · 核糖体失活蛋白基因 | 第12
页 | | · 渗透蛋白基因 | 第12
页 | | · 病原真菌酶的抑制蛋白基因 | 第12
页 | | · 植保素基因 | 第12-13
页 | | · 增强细胞壁强度酶的基因 | 第13
页 | | · 抗真菌基因转化植物研究现状 | 第13
页 | | · 芪类植保素研究进展 | 第13-19
页 | | · 芪类物质的发现 | 第14
页 | | · 芪类物质的种类、毒性、药理作用及理化性质 | 第14-15
页 | | · 植物体内芪类植保素的诱导及合成 | 第15
页 | | · 芪合酶基因及其表达调控 | 第15-16
页 | | · 芪合酶蛋白的研究 | 第16-17
页 | | · 转芪合酶基因植物及其抗病性研究 | 第17-19
页 | | · 植物遗传转化技术在玉米基因工程中的应用 | 第19-24
页 | | · 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第19-21
页 | | · 根癌农杆菌介导的遗传转化原理 | 第19-20
页 | | · 影响农杆菌转化效率的因素 | 第20-21
页 | | · 农杆菌介导的遗传转化技术在玉米上的应用 | 第21
页 | | · 基因枪法在玉米遗传转化中的应用 | 第21-23
页 | | · 基因枪法转化的原理及分类 | 第21
页 | | · 影响基因枪转化玉米效率的因素 | 第21-23
页 | | · 基因枪法在玉米遗传转化中的应用 | 第23
页 | | · 其它转化方法在玉米上的应用 | 第23-24
页 | | · 电激法 | 第23
页 | | · PEG法 | 第23-24
页 | | · 外源基因的表达 | 第24-26
页 | | · 外源基因的瞬时表达 | 第24
页 | | · 外源基因的稳定表达 | 第24
页 | | · 提高外源基因在植物体内表达的策略 | 第24-26
页 | | · 影响因素 | 第24-25
页 | | · 启动子的选择 | 第25
页 | | · 增强表达的序列选择 | 第25-26
页 | | · 转化受体的筛选研究 | 第26
页 | | Ⅲ 研究目标、基本思路和技术路线 | 第26-27
页 | | Ⅳ 材料和方法 | 第27-43
页 | | · 材料 | 第27-30
页 | | · 植物材料 | 第27
页 | | · 菌种和质粒 | 第27
页 | | · 工具酶及分子生物学试剂 | 第27-28
页 | | · 培养基 | 第28
页 | | · 玉米组织培养基 | 第28
页 | | · 细菌培养基 | 第28
页 | | · 溶液及其配制 | 第28-30
页 | | · 玉米DNA提取溶液 | 第28
页 | | · 花生RNA提取缓冲液 | 第28-29
页 | | · 大肠杆菌质粒提取缓冲液 | 第29
页 | | · TE缓冲液 | 第29
页 | | · 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第29
页 | | · SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液及配制 | 第29-30
页 | | · 方法 | 第30-43
页 | | · 引物设计及合成 | 第30
页 | | · 本实验通用方法 | 第30-35
页 | | · 玉米基因组DNA的提取 | 第30-31
页 | | · 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31
页 | | · 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31-32
页 | | · 小量碱法提取质粒 | 第32
页 | | · 花生总RNA提取 | 第32-33
页 | | · 碱裂解法大量制备并纯化大肠杆菌质粒DNA | 第33-34
页 | | · 金粉的制备 | 第34
页 | | · 制备子弹 | 第34
页 | | · 基因枪轰击步骤 | 第34-35
页 | | · 玉米 ubi－1启动子及其5’UTR的克隆及启动子活性检测 | 第35-38
页 | | · 玉米 ubi－1启动子及其5’UTR | 第35-36
页 | | · 中间载体pBIUB的构建 | 第36-37
页 | | · 载体pBIUG构建 | 第37
页 | | · 连接并转化大肠杆菌DH5α | 第37
页 | | · 酶切检测 | 第37
页 | | · 玉米ubi-1启动子活性检测 | 第37-38
页 | | · 芪合酶基因(Res)的克隆 | 第38-40
页 | | · 花生叶片总RNA的提取 | 第38
页 | | · RT－PCR | 第38-39
页 | | · 植物表达载体pBIUA的构建 | 第39-40
页 | | · Res原核表达 | 第40-41
页 | | · 原核表达载体pETA的构建 | 第40-41
页 | | · 目的蛋白的诱导表达及检测 | 第41
页 | | · 玉米遗传转化 | 第41-42
页 | | · 幼胚的诱导培养 | 第41-42
页 | | · 愈伤组织的继代培养 | 第42
页 | | · 基因枪法转化玉米Ⅱ型愈伤组织 | 第42
页 | | · 植株的再生 | 第42
页 | | · 再生苗的移栽 | 第42-43
页 | | Ⅴ 结果与分析 | 第43-60
页 | | · ubi-1启动子及玉米泛素蛋白基因5’端非翻译区及第一个内含子的克隆 | 第43-47
页 | | · 玉米基因组DNA的提取 | 第43
页 | | · PCR扩增 | 第43-44
页 | | · pGEMUB检测及测序 | 第44-47
页 | | · 中间载体pBIUB的构建及检测 | 第47-48
页 | | · Ubi启动子活性检测 | 第48-49
页 | | · pBIUG的构建及检测 | 第48-49
页 | | · 基因枪法转化洋葱表皮细胞及荧光检测 | 第49
页 | | · Res基因的克隆 | 第49-53
页 | | · 花生叶片总RNA的提取 | 第49
页 | | · Res基因的克隆 | 第49-50
页 | | · pGEMAR构建及测序 | 第50-53
页 | | · pBIUA构建检测 | 第53
页 | | · 原核表达载体pETAR的构建及检测 | 第53-54
页 | | · 目的蛋白的诱导表达 | 第54-55
页 | | · 玉米再生体系的研究 | 第55-58
页 | | · 愈伤组织诱导的影响因素 | 第55-56
页 | | · 胚龄对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第55
页 | | · 基因型对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第55-56
页 | | · 2,4-D浓度对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第56
页 | | · 愈伤组织继代的影响因素 | 第56-57
页 | | · 继代时间的影响 | 第56-57
页 | | · 生长素浓度的影响 | 第57
页 | | · 愈伤组织选择压确定 | 第57-58
页 | | · 6-BA浓度确定 | 第58
页 | | · 基因枪转化体系的优化 | 第58-60
页 | | · 轰击次数对转化效率的影响 | 第58-59
页 | | · 轰击时金粉用量对转化效率的影响 | 第59-60
页 | | · 轰击距离对转化效率的影响 | 第60
页 | | · 预培养及恢复培养对转化效率的影响 | 第60
页 | | Ⅵ 讨论 | 第60-64
页 | | Ⅶ 小结 | 第64-66
页 | | 参考文献 | 第66-73
页 | | 图 版 | 第73-75
页 | | 致 谢 | 第75页 |
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