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果实特异性启动子E8和桃反义PG基因的克隆及序列分析
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果实特异性启动子E8和桃反义PG基因的克隆及序列分析
论文目录
 
摘要第1-4页
SUMMARY第4-14页
缩略词表第14-15页
Ⅰ前言第15-16页
Ⅱ文献综述第16-28页
　　1 桃概述第16页
　　2 桃果实软化变质的影响因素第16-19页
　　　　· 水解酶类第16-17页
　　　　　　· 多聚半乳糖醛酸酶第16页
　　　　　　· 果胶甲酯酶第16-17页
　　　　　　· β-半乳糖苷酶第17页
　　　　　　· 木葡聚糖内糖基转移酶第17页
　　　　　　· 纤维素酶第17页
　　　　· 植物激素第17-18页
　　　　　　· 乙烯第17页
　　　　　　· 脱落酸第17页
　　　　　　· 生长素第17-18页
　　　　· 贮藏条件第18-19页
　　　　　　· 温度第18页
　　　　　　· 气体成分第18-19页
　　　　　　· 相对湿度第19页
　　　　· 化学药剂第19页
　　3 解决果实成熟软化研究进展第19-25页
　　　　· PG 的种类与性质第20页
　　　　· PG 基因在植物基因工程中的应用第20-22页
　　　　　　· PG 基因及其表达第20-21页
　　　　　　· PG 基因的克隆与应用第21-22页
　　　　· 反义RNA 技术及其在控制果实成熟中的应用第22-25页
　　　　　　· 抑制细胞壁降解控制果实成熟的基因工程第23-24页
　　　　　　　　· PG 反义基因途径第23页
　　　　　　　　· PE 反义基因途径第23-24页
　　　　　　· 抑制C_2H_4 合成控制果实成熟的基因工程第24页
　　　　　　　　· ACC 合成酶反义基因途径第24页
　　　　　　　　· ACC 氧化酶反义基因途径第24页
　　　　　　· 色素生物合成分子水平操作第24-25页
　　4 启动子第25-26页
　　　　· 组成性启动子第25-26页
　　　　· 组织特异性启动子第26页
　　　　· 诱导型启动子第26页
　　5 研究目的和意义第26-28页
Ⅲ试验部分第28-69页
　　1 果实特异性E8 启动子的基因克隆第28-46页
　　　　· E8 启动子的基因克隆技术路线第28页
　　　　· 实验材料第28-32页
　　　　　　· 材料第28页
　　　　　　· 试剂第28页
　　　　　　· 质粒第28页
　　　　　　· 菌株第28页
　　　　　　· 引物第28-29页
　　　　　　· 有关试剂及溶液配置第29-31页
　　　　　　　　· 主要溶液第29-31页
　　　　　　　　· 主要培养基第31页
　　　　　　· 实验仪器第31-32页
　　　　· 实验方法第32-40页
　　　　　　· 番茄幼苗的培养第32页
　　　　　　· 基因组DNA 提取第32-35页
　　　　　　　　· 高盐低pH 值法第32页
　　　　　　　　· 分步离心法第32-33页
　　　　　　　　· SDS 法第33页
　　　　　　　　· CTAB 法第33-34页
　　　　　　　　· 改良CTAB 法第34页
　　　　　　　　· 琼脂糖凝胶电泳第34-35页
　　　　　　　　　　· 胶的制备第34页
　　　　　　　　　　· 点样第34-35页
　　　　　　　　　　· 电泳第35页
　　　　　　　　　　· 染色第35页
　　　　　　　　　　· 观察第35页
　　　　　　· 目的基因的 PCR 扩增第35-36页
　　　　　　　　· PCR 反应体系优化第35页
　　　　　　　　　　· DNA 模板浓度第35页
　　　　　　　　　　· 引物用量第35页
　　　　　　　　　　· Taq 酶第35页
　　　　　　　　· PCR 扩增程序筛选第35-36页
　　　　　　　　· PCR 扩增产物的凝胶电泳观察第36页
　　　　　　· 目的DNA 片段回收第36-37页
　　　　　　· 扩增产物的克隆第37页
　　　　　　· 感受态E.coli DH5α细胞的制备第37页
　　　　　　· E.coli DH5α的转化第37-38页
　　　　　　· 重组子的筛选与鉴定第38-40页
　　　　　　　　· β-半乳糖苷基因插入失活筛选第38页
　　　　　　　　· 碱裂解法小量提取质粒DNA第38-39页
　　　　　　　　· 滞后质粒筛选第39页
　　　　　　　　· 重组子的PCR 鉴定第39页
　　　　　　　　· 重组子的HindⅢ、BamHⅠ双酶切鉴定第39-40页
　　　　　　　　· 重组子阳性克隆菌保存第40页
　　　　· 实验结果及分析第40-44页
　　　　　　· 基因组DNA 提取方法比较第40-41页
　　　　　　· PCR 反应体系优化结果第41-42页
　　　　　　· PCR 产物回收第42页
　　　　　　· 重组子滞后质粒筛选第42-43页
　　　　　　· 滞后质粒PCR 鉴定第43页
　　　　　　· 滞后质粒双酶切鉴定第43-44页
　　　　　　· 测序及序列分析结果第44页
　　　　· 讨论第44-46页
　　　　　　· 启动子的选择第44-46页
　　　　　　· β-半乳糖苷基因插入失活的蓝白菌落筛选第46页
　　2 反义多聚半乳糖醛酸酶 PG 基因的克隆第46-69页
　　　　· 技术路线第46页
　　　　· 试验材料第46-49页
　　　　　　· 试验材料第46页
　　　　　　· 试剂第46-47页
　　　　　　· 质粒第47页
　　　　　　· 菌株第47页
　　　　　　· 引物第47页
　　　　　　· 有关试剂及溶液配置第47-49页
　　　　　　　　· 主要溶液第47-49页
　　　　　　　　· 主要培养基第49页
　　　　· 实验方法第49-55页
　　　　　　· 创造无RNase 的环境第49-50页
　　　　　　· 材料的选取第50页
　　　　　　· 植物总RNA 的提取第50-51页
　　　　　　　　· way1:Trizol 法第50页
　　　　　　　　· way2:改良Trizol 法1第50-51页
　　　　　　　　· way3:改良Trizol 法2第51页
　　　　　　· RNA 的纯度、浓度和完整性的检测第51-52页
　　　　　　　　· 胶的制备第51-52页
　　　　　　　　· 预电泳，点样第52页
　　　　　　　　· 电泳第52页
　　　　　　　　· 染色第52页
　　　　　　　　· 观察第52页
　　　　　　· cDNA 第一链的合成第52-53页
　　　　　　　　· 以总RNA 为模板，Oligo(dT)15 为引物合成cDNA 第一链..第52-53页
　　　　　　　　· 以总RNA 为模板，随机引物为引物合成cDNA 第一链第53页
　　　　　　· cDNA 第二链的合成即RT-PCR 扩增第53页
　　　　　　· PCR 产物的回收第53-54页
　　　　　　· 扩增产物的克隆第54页
　　　　　　· 感受态细胞的制备:第54页
　　　　　　· 转化及鉴定:第54-55页
　　　　　　· 重组子的筛选第55页
　　　　· 结果与分析第55-62页
　　　　　　· 桃成熟果实果肉总RNA 提取体系的建立第55-58页
　　　　　　　　· 不同方法对总RNA 提取效果的影响第55-57页
　　　　　　　　· 桃果肉用量对总RNA 提取的影响第57-58页
　　　　　　· 桃子果肉总RNA 提取结果第58-59页
　　　　　　· 反转录即cDNA 第一链的合成第59页
　　　　　　· cDNA 第二条链的合成，即RT-PCR第59-60页
　　　　　　· PCR 产物的回收第60页
　　　　　　· 重组子滞后质粒筛选第60-61页
　　　　　　· 滞后质粒PCR 鉴定第61页
　　　　　　· 滞后质粒双酶切鉴定第61-62页
　　　　　　· 测序及序列分析结果第62页
　　　　· 讨论第62-69页
　　　　　　· 桃总RNA 的提取第62-64页
　　　　　　· 防止RNA 降解的策略第64页
　　　　　　· 关于桃cDNA 合成方法第64-66页
　　　　　　　　· 反转录第64-65页
　　　　　　　　· 基因克隆的策略第65-66页
　　　　　　· PG 基因的选择第66-67页
　　　　　　· 应用反义技术第67-69页
Ⅳ 结论第69-70页
致谢第70-71页
参考文献第71-78页
作者简介第78-79页
导师简介第79-80页

本篇论文共80页，点击这进入下载页面。
 
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桃 反义(PG)基因克隆论文 果实特异性E8启动子克隆论文
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