论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9
页 |
| Abstract | 第9-11
页 |
| 1 前言 | 第11-20
页 |
| · 前列腺癌背景介绍 | 第11-12
页 |
| · RTK 信号通路与鸟嘌呤核苷酸交换因子简介 | 第12-14
页 |
| · 酪氨酸激酶受体Eph 亚族的研究进展 | 第14-18
页 |
| · SGEF/CSGEF 基因背景介绍 | 第18-19
页 |
| · 前列腺癌肿瘤标志物研究的现状 | 第19
页 |
| · 本研究的方向和重点 | 第19-20
页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29
页 |
| · 材料 | 第20-21
页 |
| · 引物合成及序列测定 | 第20
页 |
| · 菌株、细胞株和质粒 | 第20
页 |
| · 细胞培养和转染试剂 | 第20
页 |
| · 分子生物学工具酶 | 第20
页 |
| · 常用分子生物学试剂盒 | 第20-21
页 |
| · 免疫学常用试剂 | 第21
页 |
| · 其他常规试剂 | 第21
页 |
| · 主要仪器设备 | 第21
页 |
| · 方法 | 第21-29
页 |
| · 感受态的制备，质粒转化和提取 | 第21-22
页 |
| · 质粒构建 | 第22-23
页 |
| · 细胞总RNA 的提取 | 第23
页 |
| · 反转录PCR | 第23-24
页 |
| · 实时荧光定量PCR | 第24-25
页 |
| · 细胞培养 | 第25-26
页 |
| · 细胞转染 | 第26
页 |
| · 稳定细胞克隆的筛选 | 第26
页 |
| · 细胞蛋白的提取 | 第26-27
页 |
| · 蛋白浓度的测定 | 第27
页 |
| · western 印记分析 | 第27
页 |
| · MTT 实验 | 第27-28
页 |
| · 软琼脂集落形成实验 | 第28
页 |
| · 平板克隆实验 | 第28
页 |
| · 裸鼠成瘤实验 | 第28
页 |
| · 数据分析 | 第28-29
页 |
| 3 结果与分析 | 第29-40
页 |
| · 稳定表达外源EphA3 基因小鼠成纤维细胞模型的建立与功能分析 | 第29-31
页 |
| · 真核表达载体pcDNA·(-)/myc-his-EphA3 的构建 | 第29-30
页 |
| · 稳定表达外源EphA3 基因的小鼠成纤维细胞株的建立 | 第30
页 |
| · EphA3 基因表达对NIH3T3 细胞的生长无显著影响 | 第30
页 |
| · EphA3 基因表达致使NIH3T3 细胞产生锚着非依赖性生长能力 | 第30-31
页 |
| · 稳定表达外源 EphA3 基因的前列腺癌 LNCaP 细胞模型的建立与功能分析 | 第31-38
页 |
| · 真核表达载体pcDNA· -EphA3-IRES-PC-1 的构建 | 第31
页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第31-33
页 |
| · 瞬时转染 | 第33
页 |
| · 鉴定细胞克隆 | 第33-34
页 |
| · EphA3、PC-1 表达促进前列腺癌细胞克隆形成能力和锚着非依赖生长能 力 | 第34-38
页 |
| · SGEF 区段融合载体的构建和表达 | 第38-40
页 |
| · SGEF 区段载体的构建 | 第39
页 |
| · IPTG 诱导pGEX-KG-SGEF 区段融合载体的表达 | 第39-40
页 |
| 4 讨论 | 第40-42
页 |
| 5 全文结论 | 第42-43
页 |
| 参考文献 | 第43-48
页 |
| 缩略词表 | 第48-49
页 |
| 附录一 | 第49-51
页 |
| 附录二 | 第51-52
页 |
| 附录三 | 第52-55
页 |
| 附录四 | 第55-57
页 |
| 致谢 | 第57页 |
