论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5
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| ABSTRACT | 第5-13
页 |
| 第1章 前言 | 第13-19
页 |
| · 降糖活性因子筛选平台的研究进展 | 第13-16
页 |
| · 一般筛选模型 | 第13-14
页 |
| · 高通量筛选模型 | 第14-15
页 |
| · 展望 | 第15-16
页 |
| · 以葡萄糖激酶为靶点的降糖药物的研究 | 第16-18
页 |
| · 主要研究内容和意义 | 第18-19
页 |
| · 主要研究内容如下 | 第18
页 |
| · 研究意义 | 第18-19
页 |
| 第2章 人胰葡萄糖激酶克隆与表达 | 第19-35
页 |
| · 材料、仪器与试剂 | 第19-21
页 |
| · 材料 | 第19
页 |
| · 主要仪器 | 第19-20
页 |
| · 主要试剂 | 第20-21
页 |
| · 方法 | 第21-28
页 |
| · 引物设计 | 第21
页 |
| · cDNA第一链合成 | 第21-22
页 |
| · 人葡萄糖激酶基因PCR扩增 | 第22
页 |
| · PCR产物鉴定 | 第22
页 |
| · 表达载体6HisT-pRSET质粒提取(CH_3COONH_4法) | 第22-23
页 |
| · 表达载体6HisT-pRSET和PCR产物NdeI-BamHI双酶切 | 第23
页 |
| · 酶切产物琼脂糖凝胶割胶回收 | 第23-24
页 |
| · PCR产物与原核表达载体6HisT-pRSET连接 | 第24
页 |
| · 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第24-25
页 |
| · 转化E.coli DH5a感受态细胞 | 第25
页 |
| · 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第25-26
页 |
| · 重组质粒6HisT-pRSET-PGK转化E.coli BL21 | 第26
页 |
| · 6HisT-pRSET-PGK融合蛋白的诱导表达 | 第26-27
页 |
| · 表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第27-28
页 |
| · 结果 | 第28-32
页 |
| · PCR扩增结果 | 第28
页 |
| · 6HisT-pRSET-PGK表达载体的构建 | 第28-30
页 |
| · 阳性克隆的菌落PCR筛选 | 第30
页 |
| · 重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31
页 |
| · 重组质粒的测序结果 | 第31
页 |
| · 重组质粒6HisT-pRSET-PGK在大肠杆菌中诱导表达及可溶性分析 | 第31-32
页 |
| · 讨论与结论 | 第32-35
页 |
| · 讨论 | 第32-33
页 |
| · 结论 | 第33-35
页 |
| 第3章 人胰葡萄糖激酶的纯化与酶活分析 | 第35-47
页 |
| · 仪器与试剂 | 第35-36
页 |
| · 主要仪器 | 第36
页 |
| · 主要试剂 | 第36
页 |
| · 方法 | 第36-40
页 |
| · PGK纯化条件的确定 | 第36-37
页 |
| · 小量蛋白纯化 | 第37
页 |
| · Ni-NTA His.Bind Resin再生 | 第37-38
页 |
| · PGK蛋白纯度分析 | 第38
页 |
| · Bradford法测定蛋白浓度 | 第38
页 |
| · PGK酶活测定 | 第38-39
页 |
| · PGK酶动力学分析 | 第39-40
页 |
| · 结果 | 第40-44
页 |
| · PGK纯化条件的确定 | 第40-41
页 |
| · PGK蛋白纯度分析 | 第41
页 |
| · PGK蛋白浓度的测定 | 第41-42
页 |
| · 反应体系的波长扫描 | 第42-43
页 |
| · PGK活力测定 | 第43-44
页 |
| · PGK酶动力学分析 | 第44
页 |
| · 讨论与结论 | 第44-47
页 |
| · 讨论 | 第44-45
页 |
| · 结论 | 第45-47
页 |
| 第4章 降糖活性因子体外筛选平台的建立 | 第47-63
页 |
| · 材料、仪器与试剂 | 第48-49
页 |
| · 材料 | 第48-49
页 |
| · 主要仪器 | 第49
页 |
| · 主要试剂 | 第49
页 |
| · 方法 | 第49-53
页 |
| · 筛选体系的建立 | 第49-50
页 |
| · Plackett-Burman试验 | 第50-51
页 |
| · Central composite design(CCD)分析法 | 第51-53
页 |
| · 预测模型的验证 | 第53
页 |
| · 中药各提取组分葡萄糖激酶激活剂的初步筛选 | 第53
页 |
| · 结果 | 第53-61
页 |
| · 筛选体系的确定 | 第53-56
页 |
| · Plackett-Burma试验结果 | 第56
页 |
| · 中心组合设计试验结果 | 第56-60
页 |
| · 预测模型的验证 | 第60
页 |
| · 中药各提取组分初步筛选结果分析 | 第60-61
页 |
| · 讨论与结论 | 第61-63
页 |
| · 讨论 | 第61-62
页 |
| · 结论 | 第62-63
页 |
| 参考文献 | 第63-67
页 |
| 致谢 | 第67-68
页 |
| 附录1:重组质粒6HisT-pRSET-PGK目的片段测序结果 | 第68-70
页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第70
页 |
| 个人简历 | 第70
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