论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6
页 |
| ABSTRACT | 第6-20
页 |
| 第一章 绪论 | 第20-34
页 |
| · 3-羟基丙酸概况 | 第20-23
页 |
| · 3-羟基丙酸理化性质与用途 | 第20-22
页 |
| · 3-羟基丙酸的生产方法 | 第22-23
页 |
| · 3-羟基丙酸的生物合成途径 | 第23-26
页 |
| · 代谢途径设计 | 第23-24
页 |
| · 以葡萄糖为底物 | 第24-25
页 |
| · 以甘油为底物 | 第25-26
页 |
| · 生产菌种 | 第26-27
页 |
| · 生理工程简介 | 第27-28
页 |
| · 合成生物学与DNA组装技术简介 | 第28-33
页 |
| · 引言 | 第28-29
页 |
| · 体内组装DNA策略 | 第29-31
页 |
| · 体外组装DNA策略 | 第31-33
页 |
| · 本课题的立项意义 | 第33-34
页 |
| 第二章 酿酒酵母醛脱氢酶ald4基因的克隆 | 第34-50
页 |
| · 引言 | 第34
页 |
| · 实验材料 | 第34-35
页 |
| · 菌株与质粒 | 第34
页 |
| · 试剂与仪器 | 第34-35
页 |
| · 培养基 | 第35
页 |
| · 实验方法 | 第35-44
页 |
| · 酿酒酵母S.cerevisiae基因组DNA的提取 | 第35-36
页 |
| · 聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因ald4 | 第36-37
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳鉴定和分离目的基因ald4 | 第37-38
页 |
| · TA克隆构建质粒pMD 18-T-ald4 | 第38-39
页 |
| · 质粒pMD 18-T-ald4转化大肠杆菌 | 第39
页 |
| · 质粒pMD 18-T-ald4的鉴定 | 第39-41
页 |
| · 质粒pKP-28a-ald4的构建 | 第41-42
页 |
| · 质粒pKP-28a-ald4的鉴定 | 第42-43
页 |
| · 重组质粒pKP-28a-ald4电击法转化K.pneumoniae | 第43-44
页 |
| · 结果与讨论 | 第44-49
页 |
| · S.cerevisiae基因组DNA的提取 | 第44-45
页 |
| · 聚合酶链式反应扩增基因ald4 | 第45-46
页 |
| · T载体重组子的鉴定 | 第46-47
页 |
| · ald4基因的序列测定与分析 | 第47
页 |
| · 重组表达载体pKP-28a-ald4的构建与鉴定 | 第47-49
页 |
| · 本章小结 | 第49-50
页 |
| 第三章 共表达醛脱氢酶与甘油脱水酶基因及产3-羟基丙酸研究 | 第50-66
页 |
| · 引言 | 第50
页 |
| · 实验材料 | 第50-51
页 |
| · 菌株、质粒、引物 | 第50-51
页 |
| · 试剂与仪器 | 第51
页 |
| · 培养基 | 第51
页 |
| · 实验方法 | 第51-58
页 |
| · 质粒pKP-28a-dhaB的构建 | 第51
页 |
| · ald4与dhaB基因串联共表达质粒的构建 | 第51-53
页 |
| · 质粒载体的去磷酸化 | 第53
页 |
| · PCR方法快速鉴定重组体DNA插入方向 | 第53-54
页 |
| · 重组质粒pKP-28a-AB电击法转化K.pneumoniae | 第54
页 |
| · 醛脱氢酶基因ald4与甘油脱水酶基因dhaB在K.pneumoniae中的表达 | 第54-57
页 |
| · 重组菌的发酵培养 | 第57
页 |
| · 高效液相色谱(HPLC)检测3-羟基丙酸产物浓度 | 第57
页 |
| · 改进的高碘酸钠氧化法测定发酵液中的甘油浓度 | 第57-58
页 |
| · 结果与讨论 | 第58-64
页 |
| · 质粒pKP-28a-dhaB的构建 | 第58-59
页 |
| · ald4-EcoR I-SD基因的克隆 | 第59-60
页 |
| · PCR方法快速鉴定重组体DNA插入方向 | 第60
页 |
| · 串联共表达质粒pKP-28a-AB的鉴定 | 第60-61
页 |
| · 重组菌共表达ald4与dhaB基因 | 第61-62
页 |
| · 重组菌K.pneumoniae(pKP-28a-AB)以甘油为底物发酵生产3-羟基丙酸 | 第62-64
页 |
| · 本章小结 | 第64-66
页 |
| 第四章 重组菌K.pneumoniae生产3-羟基丙酸的研究 | 第66-76
页 |
| · 引言 | 第66
页 |
| · 实验材料 | 第66-67
页 |
| · 菌株与质粒 | 第66
页 |
| · 试剂与仪器 | 第66-67
页 |
| · 培养基 | 第67
页 |
| · 实验方法 | 第67-69
页 |
| · 发酵条件与培养方法 | 第67
页 |
| · 发酵参数测定与分析 | 第67-69
页 |
| · 结果与讨论 | 第69-74
页 |
| · 重组菌K.pneumoniae K2-AB的发酵特性 | 第69-70
页 |
| · 重组菌K.pneumoniae K2-AB的放大培养研究 | 第70-72
页 |
| · 重组菌K.pneumoniae Kp5-3-AB的产3-羟基丙酸研究 | 第72-74
页 |
| · 本章小结 | 第74-76
页 |
| 第五章 消除K.pneumoniae重组型质粒的方法与应用 | 第76-86
页 |
| · 引言 | 第76
页 |
| · 实验材料 | 第76-78
页 |
| · 菌株与质粒 | 第76-77
页 |
| · 试剂与仪器 | 第77
页 |
| · 培养基 | 第77-78
页 |
| · 实验方法 | 第78-79
页 |
| · 连续传代法消除K.pneumoniae质粒 | 第78
页 |
| · SDS方法消除K.pneumoniae质粒 | 第78
页 |
| · 质粒的再导入 | 第78
页 |
| · 质粒消除在生理工程中的应用 | 第78-79
页 |
| · 种子发酵培养 | 第79
页 |
| · 结果与讨论 | 第79-85
页 |
| · 连续传代培养对质粒消除的影响 | 第79-80
页 |
| · SDS方法消除重组质粒 | 第80-81
页 |
| · 质粒消除菌重新导入新质粒 | 第81-82
页 |
| · 质粒消除方法在生理工程中的应用 | 第82-85
页 |
| · 本章小结 | 第85-86
页 |
| 第六章 DNA快速组装技术的理论研究与应用 | 第86-98
页 |
| · 引言 | 第86
页 |
| · 实验材料 | 第86-87
页 |
| · 菌株、质粒 | 第86
页 |
| · 试剂与仪器 | 第86-87
页 |
| · 培养基 | 第87
页 |
| · 实验方法 | 第87-90
页 |
| · 大肠杆菌E.coli基因组的提取 | 第87-88
页 |
| · 大肠杆菌E.coli K-12 aldH基因的准备 | 第88
页 |
| · 线性化质粒骨架的准备 | 第88
页 |
| · Polymerase cycling assembly(PCA)连接质粒骨架与插入基因 | 第88-90
页 |
| · 结果与讨论 | 第90-97
页 |
| · 利用DNA组装技术构建"细胞工厂" | 第90-93
页 |
| Ⅰ.修建结构架构(Building structural frameworks) | 第91-92
页 |
| Ⅱ.安装固定设备(Setting fixed parts) | 第92
页 |
| Ⅲ.铺设管线(Laying pipelines) | 第92
页 |
| Ⅳ.增添移动设施(Equipping mobile devices) | 第92
页 |
| Ⅴ.安装调控软件(Installing regulatory software) | 第92-93
页 |
| · 大肠杆菌E.coli K-12基因组DNA的提取 | 第93-94
页 |
| · 大肠杆菌E.coli K-12 aldH基因的克隆 | 第94-95
页 |
| · 质粒骨架pKP-28a-dhaB的线性化 | 第95
页 |
| · 重组质粒pKP-28a-BH阳性克隆子的鉴定 | 第95-97
页 |
| · 本章小结 | 第97-98
页 |
| 第七章 实验总结与建议 | 第98-100
页 |
| · 主要结论 | 第98-99
页 |
| · 问题与建议 | 第99-100
页 |
| 参考文献 | 第100-104
页 |
| 附录1 试剂 | 第104-106
页 |
| 附录2 仪器设备 | 第106-107
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| 致谢 | 第107-108
页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第108-109页 |
