论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 羊奶营养价值 | 第13页 |
| 1.2 乳腺组织脂质代谢调控研究进展 | 第13-16页 |
| 1.3 肝X受体基因 | 第16-19页 |
| 1.3.1 LXRs蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 LXRs基因的配体与活化过程 | 第17-18页 |
| 1.3.3 LXRs基因的表达调控 | 第18-19页 |
| 1.4 LXRβ基因与脂质代谢 | 第19-21页 |
| 1.5 LXRs与疾病 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 西农萨能羊LXRβ基因的克隆 | 第23-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第24页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.1.6 山羊乳腺组织总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.1.7 cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.1.8 LXRβ基因CDS扩增 | 第25-26页 |
| 2.1.9 回收克隆产物 | 第26页 |
| 2.1.10 回收产物的3'端平末端加A | 第26页 |
| 2.1.11 目的基因的连接、转化 | 第26-27页 |
| 2.1.12 质粒提取及鉴定 | 第27页 |
| 2.1.13 序列分析 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.2.1 组织总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 西农萨能奶山羊LXRβ基因cDNA克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.3 西农萨能奶山羊LXRβ基因的序列分析 | 第29-31页 |
| 2.2.4 山羊LXRβ基因的系统进化树分析 | 第31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 奶山羊LXRβ基因的过表达研究 | 第33-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-38页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 3.1.3 pAdTrack-CMV-LXRβ穿梭载体的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.4 PmeⅠ线性化pAdTrack-CMV-LXRβ质粒 | 第35页 |
| 3.1.5 pAd-LXRβ重组质粒的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.6 pAd-LXRβ重组质粒PacI酶切产物回收 | 第36页 |
| 3.1.7 Ad-LXRβ重组腺病毒的包装与扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.8 腺病毒超表达效果检测 | 第37页 |
| 3.1.9 荧光定量PCR | 第37页 |
| 3.1.10 Western blotting试验 | 第37页 |
| 3.1.11 双荧光素酶试验 | 第37-38页 |
| 3.1.12 甘油三酯检测 | 第38页 |
| 3.1.13 油红O染色检测 | 第38页 |
| 3.1.14 细胞内脂肪酸的提取与检测 | 第38页 |
| 3.2 结果和分析 | 第38-44页 |
| 3.2.1 构建与鉴定pAdTrack-CMV-LXRβ载体 | 第38-39页 |
| 3.2.2 构建重组腺病毒载体pAd-LXRβ | 第39页 |
| 3.2.3 Ad-LXRβ腺病毒包装 | 第39-40页 |
| 3.2.4 感染乳腺上皮细胞最佳MOI值的确定 | 第40页 |
| 3.2.5 LXRβ基因超表达后对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第40-42页 |
| 3.2.6 LXRβ基因超表达后对SREBP-1c启动子的影响 | 第42页 |
| 3.2.7 过表达LXRβ影响细胞内脂肪酸的组成 | 第42-43页 |
| 3.2.8 过表达LXRβ基因对细胞脂滴的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.9 过表达LXRβ基因对甘油三酯的影响 | 第44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 奶山羊LXRβ基因的RNA干扰研究 | 第46-53页 |
| 4.1 材料和方法 | 第46-47页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第46页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 4.1.3 靶向LXRs基因的siRNA序列设计 | 第46页 |
| 4.1.4 siRNA干扰效率检测 | 第46-47页 |
| 4.1.5 荧光定量PCR | 第47页 |
| 4.1.6 Western blotting试验 | 第47页 |
| 4.1.7 双荧光素酶试验 | 第47页 |
| 4.1.8 油红O检测 | 第47页 |
| 4.1.9 甘油三酯检测 | 第47页 |
| 4.2 结果和分析 | 第47-51页 |
| 4.2.1 LXRβ基因的干扰效率检测 | 第47-48页 |
| 4.2.2 LXRβ基因干扰后对脂质代谢基因的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.3 LXRβ基因干扰后对FASN蛋白表达的影响 | 第49页 |
| 4.2.4 LXRβ基因干扰后对SREBP1c启动子的影响 | 第49-50页 |
| 4.2.5 干扰LXRβ基因对细胞中脂滴的影响 | 第50页 |
| 4.2.6 干扰LXRβ基因对细胞中甘油三酯含量的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 讨论 | 第51-52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第54-55页 |
| 存在问题及展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 缩略词 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
