论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 抗病毒肽 | 第11-13页 |
| 1.1 EB肽研究进展 | 第11-12页 |
| 1.1.1 抗牛痘病毒作用 | 第12页 |
| 1.1.2 抗流感病毒作用 | 第12页 |
| 1.2 蓝藻抗病毒蛋白-研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 抗流感病毒作用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 抗埃博拉病毒作用 | 第13页 |
| 1.2.3 抗免疫缺陷病毒作用 | 第13页 |
| 2 Myostatin前肽 | 第13-14页 |
| 3 猪繁殖与呼吸综合征 | 第14-20页 |
| 3.1 PRRSV分子生物学特性 | 第15-16页 |
| 3.2 PRRSV相关的细胞受体 | 第16-18页 |
| 3.2.1 硫酸乙酞肝素 | 第16-17页 |
| 3.2.2 唾液酸粘附素 | 第17页 |
| 3.2.3 CD163 | 第17页 |
| 3.2.4 波形蛋白 | 第17页 |
| 3.2.5 CD151 | 第17-18页 |
| 3.3 PRRSV相关的细胞因子 | 第18-20页 |
| 3.3.1 白细胞介素-6 | 第18页 |
| 3.3.2 肿瘤坏死因子α | 第18-19页 |
| 3.3.3 热休克蛋白B1 | 第19-20页 |
| 试验一 猪肌抑素前肽-抗病毒肽在MARC-145细胞对PRRSV抑制试验 | 第20-37页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 细胞、质粒和毒株来源 | 第20页 |
| 1.2 试验试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-28页 |
| 2.1 Marc-145细胞培养 | 第21-23页 |
| 2.1.1 Marc-145细胞复苏 | 第21-22页 |
| 2.1.2 Marc-145细胞传代培养 | 第22页 |
| 2.1.3 Marc-145细胞冻存 | 第22页 |
| 2.1.4 质粒载体的转染 | 第22-23页 |
| 2.2 提取无内毒素质粒DNA | 第23-24页 |
| 2.3 细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.4 cDNA的反转录合成 | 第24-25页 |
| 2.5 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 2.6 PCR检测目的基因 | 第25-26页 |
| 2.7 PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| 2.8 荧光定量PCR检测目的基因mRNA的表达 | 第27-28页 |
| 2.9 猪肌抑素前肽-抗病毒肽的病毒抑制试验 | 第28页 |
| 2.9.1 PRRSV病毒的毒力测定 | 第28页 |
| 2.9.2 不同转染组细胞凋亡检测 | 第28页 |
| 2.10 数据统计分析 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-34页 |
| 3.1 PRRSV病毒的毒力测定结果 | 第28-29页 |
| 3.2 总RNA提取与检测结果 | 第29-30页 |
| 3.3 PCR检测病毒感染结果 | 第30-31页 |
| 3.4 荧光定量PCR检测猪肌抑素前肽-抗病毒肽融合基因过表达效果 | 第31-32页 |
| 3.4.1 目的基因与内参基因的扩增动力学曲线和熔解曲线 | 第31-32页 |
| 3.4.2 不同转染组目的基因mRNA过表达结果 | 第32页 |
| 3.5 猪肌抑素前肽-抗病毒肽的病毒活性抑制试验结果 | 第32-34页 |
| 4 小结 | 第34页 |
| 5 讨论 | 第34-37页 |
| 5.1 关于细胞凋亡检测方法选择 | 第34-35页 |
| 5.2 MSTN前肽-抗病毒肽抑制PRRSV的作用 | 第35-37页 |
| 试验二 猪肌抑素前肽-抗病毒肽对PRRSV相关受体及细胞因子mRNA表达的影响 | 第37-48页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-38页 |
| 2.1 Marc-145细胞处理 | 第37页 |
| 2.2 荧光定量PCR检测目的基因mRNA的表达 | 第37-38页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| 2.2.2 总RNA提取和cDNA的生成 | 第38页 |
| 2.2.3 荧光定量反应体系与条件 | 第38页 |
| 2.3 数据统计分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.1 不同处理组Marc-145细胞总RNA提取结果 | 第38-39页 |
| 3.2 CD163和CD151基因mRNA表达结果 | 第39-42页 |
| 3.2.1 CD163、CD151与内参基因GAPDH的扩增动力学曲线和熔解曲线 | 第39页 |
| 3.2.2 不同处理组CD163和CD151 mRNA表达结果 | 第39-42页 |
| 3.3 IL-6、TNF-α和HSPB1基因mRNA表达结果 | 第42-46页 |
| 3.3.1 IL-6、TNF-α、HSPB1与内参基因的GAPDH扩增动力学曲线和熔解曲线 | 第42页 |
| 3.3.2 不同处理组IL-6、TNF-α和HSPB1 mRNA表达结果 | 第42-46页 |
| 4 小结 | 第46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| 5.1 细胞本身为抵御PRRSV所做出的反应 | 第46页 |
| 5.2 EB和CVN蛋白抗病毒肽抵御PRRSV的作用机制 | 第46-48页 |
| 全文结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| Abstract | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
