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重复序列类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的分泌表达
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重复序列类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的分泌表达
论文目录
 
摘要第1-4 页
Abstract第4-8 页
1 引言第8-21 页
　　· 胶原蛋白第8-14 页
　　　　· 胶原蛋白的分布第8 页
　　　　· 胶原蛋白的结构第8-10 页
　　　　· 胶原蛋白的种类第10-11 页
　　　　· 胶原蛋白的性质第11 页
　　　　· 胶原蛋白的功能及应用第11 页
　　　　· 胶原蛋白的生产第11-13 页
　　　　· 胶原蛋白与疾病第13-14 页
　　· 明胶第14 页
　　· 胶原、胶原蛋白与明胶第14-15 页
　　· 毕赤酵母表达系统第15-16 页
　　· 重组鼠胶原蛋白第16-17 页
　　· 重组(类)人胶原蛋白第17-18 页
　　· 重组人胶原蛋白的应用与发展第18-19 页
　　· 本论文研究内容与定位第19-21 页
2 材料与试剂第21-24 页
　　· 菌株与质粒第21 页
　　· 主要试剂第21-22 页
　　· 主要仪器设备第22-23 页
　　· 培养基和常用溶液配制第23-24 页
3 类人胶原蛋白基因的合成、构建及表达第24-70 页
　　· 表达载体构建策略第24-25 页
　　· 实验方法第25-42 页
　　　　· 表达载体的构建与鉴定第25-33 页
　　　　　　· 类人胶原蛋白基因单体的设计合成第25-26 页
　　　　　　· 类人胶原蛋白基因单体的获得和接头复性第26 页
　　　　　　· 类人胶原蛋白基因三串联体克隆载体的构建第26-29 页
　　　　　　· 类人胶原蛋白基因六串联体克隆载体的构建第29-30 页
　　　　　　· 类人胶原蛋白基因六串联体表达载体的构建第30-32 页
　　　　　　· 表达载体的鉴定第32-33 页
　　　　· 表达载体电转化酵母宿主菌GS115第33-34 页
　　　　　　· 待转化质粒的线性化第33-34 页
　　　　　　· 酵母GS115感受态制备第34 页
　　　　　　· 电击转化GS115第34 页
　　　　· 高表达重组酵母的筛选第34-37 页
　　　　　　· 甲醇利用表型的筛选第34-35 页
　　　　　　· 菌落PCR鉴定重组酵母第35-36 页
　　　　　　· 高拷贝重组酵母的筛选第36-37 页
　　　　　　· 高表达重组酵母的筛选第37 页
　　　　· 类人胶原蛋白的酵母诱导表达第37-41 页
　　　　　　· 酵母工程菌的发酵和诱导表达第37-38 页
　　　　　　· 表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE第38-40 页
　　　　　　· 诱导表达条件优化第40-41 页
　　　　· 类人胶原蛋白的纯化初探第41-42 页
　　　　　　· 硫酸铵分级盐析第41-42 页
　　　　　　· 丙酮分级沉淀第42 页
　　· 结果与讨论第42-69 页
　　　　· 类人胶原蛋白基因单体gel第42-43 页
　　　　· 类人胶原蛋白串联基因载体构建与鉴定第43-54 页
　　　　　　· G1片段的酶切鉴定第43-44 页
　　　　　　· pUC57-AlG3和pUC57-A1G6的构建与鉴定第44-48 页
　　　　　　· pPIC9KG6的构建与鉴定第48-54 页
　　　　· 毕赤酵母电转化及高表达重组酵母的筛选与鉴定第54-62 页
　　　　　　· 表达载体pPIC9KG6线性化第54-55 页
　　　　　　· 毕赤酵母GS115电转化及菌落PCR筛选结果第55-57 页
　　　　　　· 高拷贝重组酵母筛选结果第57 页
　　　　　　· 高表达重组酵母筛选结果第57-62 页
　　　　· 类人胶原蛋白的表达及条件优化第62-65 页
　　　　　　· 最佳诱导时间优化结果第62-64 页
　　　　　　· 正交试验结果分析第64-65 页
　　　　· 类人胶原蛋白的纯化第65-67 页
　　　　　　· 硫酸铵分级盐析结果第65-66 页
　　　　　　· 丙酮分级沉淀结果第66-67 页
　　　　· 关于gel基因设计的讨论第67-69 页
　　· 展望第69-70 页
结论第70-71 页
附录A 基因序列第71-72 页
附录B 蛋白质序列第72-74 页
致谢第74-75 页
参考文献第75-79 页

本篇论文共79页，点击这进入下载页面。
 
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