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N-端聚乙二醇化L-门冬酰胺酶的制备、纯化及鉴定研究

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N-端聚乙二醇化L-门冬酰胺酶的制备、纯化及鉴定研究
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
1 绪论第9-13页
  · 门冬酰胺酶应用状况第9-10页
  · PEG 化概述第10-11页
  · 研究目的和意义第11页
  · 主要研究内容及技术路线第11-13页
2 实验材料与方法第13-26页
  · 主要实验材料第13-14页
  · 主要试剂的配置第14-17页
    · L-ASP 原酶溶液配置第14-15页
    · mPEG-丙醛配置第15页
    · NaCNBH_3 溶液配置第15页
    · SDS-PAGE 溶液第15页
    · 凝胶过滤缓冲液第15页
    · 离子交换缓冲液第15-16页
    · 反相色谱缓冲液第16页
    · 酶活力测定溶液第16页
    · 水平等电聚焦溶液第16页
    · Western Blot 溶液第16-17页
  · 主要实验仪器第17-18页
  · 实验方法第18-26页
    · mPEG-ButyALD-20000 与 L-Asp 修饰反应及反应产物分析第18-20页
    · PEG-L-ASP 的分离纯化第20页
    · PEG-L-ASP 含量测定第20-22页
    · 酶活力测定第22页
    · PEG-L-ASP 鉴定第22-26页
3 结果与讨论第26-46页
  · PEG-L-ASP 的制备工艺研究第26-32页
    · 偶联修饰剂的选择第26页
    · mPEG 修饰L-ASP 的工艺优化第26-32页
  · PEG-L-ASP 的分离纯化第32-38页
    · 阴离子交换色谱粗分离L-ASP 和PEG-L-ASP 偶联物第32-35页
    · 凝胶过滤色谱精纯化PEG-L-ASP第35-37页
    · Sephadex G-25 脱除游离小分子第37页
    · 修饰产物纯化前后SDS-PAGE 电泳比较第37-38页
  · PEG-L-ASP 的结构确证和理化性质第38-45页
    · Bradford 法测蛋白含量第38-39页
    · 酶活力测定第39页
    · 紫外扫描分析第39-40页
    · 荧光胺法测修饰度分析第40-42页
    · 等电点测定第42页
    · Western Blot 免疫印迹分析第42-43页
    · 胰蛋白酶肽图分析第43-45页
  · 小结第45-46页
4 结论与展望第46-49页
  · 结论第46-47页
  · 展望第47页
  · 创新点第47-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-54页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录第54-55页
附件A:L-门冬酰胺酶的结构与修饰第55-62页
附件B:蛋白质的PEG 修饰第62-66页

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