论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-18页 |
| 1 AGO 蛋白家族的研究现状 | 第13-14页 |
| 2 RNAi 研究进展 | 第14-15页 |
| 3 小 RNA 研究进展 | 第15-16页 |
| · siRNA | 第15页 |
| · miRNA | 第15页 |
| · piRNA | 第15-16页 |
| 4 转座因子 | 第16-17页 |
| 5 展望 | 第17-18页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第18-20页 |
| 1 实验目的和意义 | 第18页 |
| 2 实验内容 | 第18-19页 |
| 3 实验流程图 | 第19-20页 |
| 第三章 免疫共沉淀分离 BmAGO2 及其结合的 RNA | 第20-28页 |
| 1 材料、仪器及试剂 | 第20-21页 |
| · 材料与仪器 | 第20页 |
| · 试剂配制 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| · 家蚕 BmN 细胞的复苏、培养与冻存 | 第21-22页 |
| · 病毒的感染家蚕 BmN 细胞 | 第22页 |
| · Bradford 法测定蛋白浓度 | 第22-23页 |
| · Western blotting 检测 HIS-EGFP/HIS-BmAGO2 在家蚕 BmN 细胞中的表达 | 第23页 |
| · 家蚕细胞中 HIS- BmAGO2 融合蛋白的免疫共沉淀 | 第23-24页 |
| · Western blotting 检测免疫共沉淀分离 BmAGO2 蛋白 | 第24页 |
| · BmAGO2 结合 RNA 的提取 | 第24页 |
| · RNA 质量鉴定 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| · 蛋白样品浓度 | 第24-25页 |
| · 融合蛋白在家蚕 BmN 细胞中的表达及 Western blotting 鉴定 | 第25页 |
| · 免疫共沉淀分离 BmAGO2 蛋白 | 第25-26页 |
| · 免疫共沉淀后 BmAGO2 结合的 RNA | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第四章 BmAGO2 结合 RNA 的高通量测序及生物信息学分析 | 第28-45页 |
| 1 材料与方法 | 第28-30页 |
| · 测序样本 | 第28页 |
| · 测序流程 | 第28-29页 |
| · 测序数据分析 | 第29-30页 |
| 2 结果分析 | 第30-43页 |
| · 测序 RNA 的基本信息 | 第30-31页 |
| · BmAGO2 结合的 mRNA | 第31-39页 |
| · BmAGO2 结合的 TEs | 第39-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 BmAGO2, BmAGO3 和 BmSIWI 对转座因子(TEs)的调控分析 | 第45-66页 |
| 1 材料、仪器与试剂 | 第45页 |
| · 材料与仪器 | 第45页 |
| · 试剂配方 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-52页 |
| · 家蚕 BmN 细胞总 RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第45-46页 |
| · 家蚕 BmN 细胞 cDNA 的合成 | 第46页 |
| · dsRNA 的合成 | 第46-48页 |
| · 转录合成单链 RNA | 第48-49页 |
| · RNAi-dsRNA 的转染 | 第49页 |
| · pIEx-1-BmAGO2 的转染 | 第49页 |
| · RNA 提取及 cDNA 合成 | 第49-50页 |
| · qRT -PCR 法检测中 BmAGO2 /BmAGO3 / BmSIWI 基因和 TE 转座子的表达水平 | 第50-52页 |
| 3 结果 | 第52-64页 |
| · dsRNA 的电泳检测 | 第52-53页 |
| · qRT - PCR 检测 RNA 干扰效率 | 第53-56页 |
| · BmAGO2 过表达对 TEs 的转录水平的影响 | 第56-59页 |
| · RNA 干扰 BmAGO2，BmAGO3，BmSIWI 后对 TEs 的转录水平的影响 | 第59-64页 |
| · 讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79
页 |
