论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
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| Abstract | 第7-16
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| 第一章 综述 | 第16-24
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| 1.喜树碱概况 | 第16-19
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| · 植物次生代谢工程 | 第16
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| · 喜树碱概述 | 第16-17
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| · 喜树萜类吲哚生物碱的合成途径 | 第17-18
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| · 喜树萜类吲哚生物碱的合成途径中的关键酶STR | 第18-19
页 |
| · 日本蛇根草 | 第19
页 |
| 2.植物凝集素概况 | 第19-22
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| · 凝集素定义 | 第19-20
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| · 植物凝集素的分类 | 第20
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| · 植物凝集素的性质 | 第20-21
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| · 植物凝集素的功能 | 第21
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| · 植物凝集素在抗虫基因工程中的应用 | 第21-22
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| · 龟背竹 | 第22
页 |
| 3 本研究的目标及拟解决的问题 | 第22-24
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| 第二章 材料和方法 | 第24-38
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| · 材料 | 第24-26
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| · 植物材料 | 第24
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| · 菌种 | 第24
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| · 载体 | 第24
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| · 试剂及溶液 | 第24
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| · 主要仪器 | 第24-25
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| · 常用试剂 | 第25-26
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| · 实验方法 | 第26-33
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| · 日本蛇根草总RNA的提取与检测 | 第26
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| · 准备工作 | 第26
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| · 用TIANGENRNA prep植物总RNA提取试剂盒抽提日本蛇根草总RNA | 第26
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| · 检测RNA的质量与纯度 | 第26
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| · 日本蛇根草异胡豆苷合成酶编码基因(OjSTR)的克隆 | 第26-30
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| · 3'RACE | 第26-27
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| · cDNA第一链的合成 | 第26
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| · 3'端cDNA片段扩增 | 第26-27
页 |
| · 5'RACE | 第27-29
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| · cDNA第一链的合成 | 第27
页 |
| · 5'端cDNA片段扩增 | 第27-29
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| · OjSTR ORF的扩增 | 第29
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| · 凝胶电泳条带或酶切产物的柱层析纯化回收 | 第29
页 |
| · DNA回收片段与pMD18-T easy vector载体的连接 | 第29
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| · 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第29-30
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| · DNA与pMD18-T easy Vector的连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第30
页 |
| · 阳性克隆的筛选及测序鉴定 | 第30
页 |
| · OjSTR在日本蛇根草的根、茎、叶、花的RT-PCR分析 | 第30
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| · RNA的提取 | 第30
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| · RT-PCR | 第30
页 |
| · 甲基茉莉酸(MJ)对OjSTR在日本蛇根草中表达影响的RT-PCR分析 | 第30-31
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| · 甲基茉莉酸(MJ)对日本蛇根草植株的诱导处理 | 第30-31
页 |
| · RT-PCR检测 | 第31
页 |
| · 水杨酸(SA)对OjSTR在日本蛇根草中表达影响的RT-PCR分析 | 第31
页 |
| · 水杨酸(SA)对日本蛇根草植株的诱导处理 | 第31
页 |
| · RT-PCR检测 | 第31
页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第31-32
页 |
| · 植物表达载体pCAMBIA1304~+的构成 | 第31
页 |
| · 植物表达载体pCAMBIA1304~+-OjSTR的构建 | 第31-32
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| · 植物表达载体转化发根农杆菌C58C1 | 第32-33
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| · 发根农杆菌C58C1感受态细胞的制备 | 第32
页 |
| · 携带表达载体pCAMBIA1304~+-OjSTR的C58C1获得 | 第32-33
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| · C58C1介导的pCAMBIA1304~+-OjSTR遗传转化 | 第33
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| · 携带植物表达载体pCAMBIA1304~+-OjSTR的C58C1的保存和活化 | 第33
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| · 喜树下胚轴的预培养 | 第33
页 |
| · 农杆菌与喜树下胚轴外植体的共培养 | 第33
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| · 毛状根的诱导和培养 | 第33
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| · 龟背竹凝集素基因的克隆 | 第33-38
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| · 龟背竹叶RNA的提取与检测 | 第33-34
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| · 准备工作 | 第34
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| · 龟背竹叶RNA抽提 | 第34
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| · 检测RNA的质量与纯度 | 第34
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| · 龟背竹凝集素编码基因(MDA)的克隆 | 第34-36
页 |
| · MDA 3'RACE | 第34
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| · cDNA第一链的合成 | 第34
页 |
| · MDA3'端cDNA片段扩增 | 第34
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| · MDA5'RACE | 第34-35
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| · cDNA第一链的合成 | 第34-35
页 |
| · 5'端cDNA片段扩增 | 第35
页 |
| · MDAORF的扩增 | 第35
页 |
| · 凝胶电泳条带的柱层析纯化回收 | 第35
页 |
| · DNA回收片段与pMD18-T easy vector(Takara)载体的连接 | 第35
页 |
| · 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第35
页 |
| · DNA与pMD18-T easy Vector的连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第35-36
页 |
| · 阳性克隆的筛选及测序鉴定 | 第36
页 |
| · MDA在龟背竹根、茎、叶中的RT-PCR分析 | 第36
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| · 龟背竹RNA的提取 | 第36
页 |
| · RT-PCR鉴定 | 第36
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| · 植物表达载体的构建 | 第36-37
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| · 植物表达载体pCAMBIA1304~+的构建 | 第36
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| · 植物表达载体pCAMBIA1304~+-MDA的构建 | 第36-37
页 |
| · 携带植物表达载体pCAMBIA1304~+-MDA的根癌农杆菌EHA105介导遗传转化烟草 | 第37-38
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| · 根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA1304~+-MDA)的培养 | 第37
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| · 烟草无菌苗的准备 | 第37
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| · 烟草植株的遗传转化 | 第37
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| · 植物DNA的抽提 | 第37-38
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| 第三章 结果与讨论 | 第38-60
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| · 日本蛇根草异胡豆苷合成酶基因的克隆分析 | 第38-49
页 |
| · 日本蛇根草总RNA的提取 | 第38
页 |
| · 日本蛇根草异胡豆苷合成酶基因(OjSTR)的克隆 | 第38-39
页 |
| · OjSTR的3'RACE | 第38-39
页 |
| · OjSTR的5'RACE | 第39
页 |
| · OjSTR基因开放阅读框的扩增、序列分析及蛋白质二、三级结构预测 | 第39-43
页 |
| · OjSTR的分子进化分析 | 第43-44
页 |
| · 日本蛇根草异胡豆合成酶基因(OjSTR)的表达部位特异性分析 | 第44
页 |
| · 甲基茉莉酸对日本蛇根草异胡豆苷合成酶基因的诱导 | 第44-45
页 |
| · 水杨酸对日本蛇根草异胡豆苷合成酶基因的诱导 | 第45-46
页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第46-47
页 |
| · PCR扩增OjSTR基因 | 第46
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| · 植物表达载体pCAMBIA1304~+-OjSTR的构建 | 第46-47
页 |
| · 植物表达载体转化发根农杆菌C58C1 | 第47
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| · 喜树毛状根的诱导和培养 | 第47-48
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| · 喜树毛状根的诱导 | 第47-48
页 |
| · 喜树状根液体培养 | 第48
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| · 小结 | 第48-49
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| · 龟背竹凝集素基因(MDA)的克隆 | 第49-60
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| · 龟背竹总RNA的提取 | 第49
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| · MDA的3'RACE | 第49-50
页 |
| · MDA的5'RACE | 第50
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| · MDA基因开放阅读框的扩增、序列分析及蛋白质二、三级结构预测 | 第50-54
页 |
| · MDA分子进化分析 | 第54-55
页 |
| · 龟背竹凝集素基因(MDA)的表达部位特异性分析 | 第55-56
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| · 植物表达载体的构建 | 第56-57
页 |
| · PCR扩增MDA基因 | 第56
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| · 植物表达载体的构建pCAMBIA1304~+-MDA | 第56-57
页 |
| · 植物表达载体(pCAMBIA1304~+-MDA)转化根癌农杆菌EHA105 | 第57
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| · 烟草的遗传转化 | 第57-58
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| · 转基因烟草的PCR检测 | 第58-59
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| · 小结 | 第59-60
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| 第四章 论文小结与展望 | 第60-63
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| · 日本蛇根草异胡豆苷合成酶基因的克隆分析 | 第60-61
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| · 龟背竹凝集素基因的克隆与分析 | 第61-63
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| 参考文献 | 第63-71
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| 附录:硕士期间发表论文(含待发表): | 第71-72
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| 致谢 | 第72
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