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抗草甘膦真菌的分离及EPSPS基因克隆与表达研究
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抗草甘膦真菌的分离及EPSPS基因克隆与表达研究
论文目录
 
摘要第10-12页
Abstract第12-14页
1 前言第14-27页
　　· 草甘膦生产及发展第14页
　　· 草甘膦性质及作用机理第14-18页
　　　　· 草甘膦结构及理化性质第14-15页
　　　　· 草甘膦的优缺点第15-17页
　　　　· 草甘膦作用机制第17-18页
　　· 草甘膦抗性来源第18-20页
　　· EPSPS研究进展第20-23页
　　　　· EPSP合酶分类第20页
　　　　· EPSP合酶的定位和转运肽第20-21页
　　　　· EPSP合酶的高级结构与活性区第21-22页
　　　　· EPSPS基因研究第22-23页
　　· 抗草甘膦转基因作物的发展第23-25页
　　· 本研究目的与意义第25-26页
　　· 本研究技术路线第26-27页
2 材料与方法第27-44页
　　· 实验材料第27-29页
　　　　· 供试菌种与载体第27页
　　　　· 供试除草剂第27页
　　　　· 供试培养基第27页
　　　　· 常用试剂配制方法第27-28页
　　　　· 试剂盒、酶及其它试剂耗材第28页
　　　　· 引物第28页
　　　　· 主要仪器设备第28-29页
　　· 菌株TY-JM的分离鉴定及系统发育树研究第29-32页
　　　　· 菌株TY-JM的富集、分离与纯化第29页
　　　　· 菌株TY-JM的形态学研究第29-30页
　　　　· 菌株TY-JM的生理生化特性测定第30页
　　　　2.2.4 18S rRNA的PCR扩增和序列测定第30-32页
　　　　· 系统发育树的构建第32页
　　· 菌株TY-JM的cDNA文库构建第32-36页
　　　　· TY-JM总RNA的提取第32-33页
　　　　· 菌株全长cDNA文库的构建及文库质量鉴定第33-36页
　　· 菌株TY-JM的EPSPS基因克隆第36-37页
　　　　· 引物设计第36页
　　　　· PCR扩增EPSPS基因片段第36页
　　　　· 目的片段回收第36-37页
　　　　· 连接载体第37页
　　　　· 转化及克隆检测第37页
　　　　· 测序第37页
　　　　· 生物信息学分析第37页
　　· 菌株TZ1985的EPSPS基因克隆第37-40页
　　　　· 基因组DNA的提取第37-38页
　　　　· 菌株TZ1985的AROM基因DNA片段分离第38-39页
　　　　· 菌株TZ1985的EPSPS基因片段分离第39-40页
　　· EPSPS基因的原核表达研究第40-44页
　　　　· 制备带酶切位点的EPSPS基因片段第40-42页
　　　　· 制备载体第42页
　　　　· 连接重组质粒第42页
　　　　· 重组质粒的测序验证第42页
　　　　· 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第42-43页
　　　　· 重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定第43-44页
3 结果与分析第44-64页
　　· 抗草甘膦菌株TY-JM的分离鉴定第44-47页
　　　　· 菌株的分离第44页
　　　　· 菌株的形态学特征第44-45页
　　　　· 菌株的生理生化特性第45页
　　　　3.1.4 18S rRNA序列分析第45-47页
　　　　3.1.5 基于18S rRNA序列的系统发育树构建第47页
　　· 菌株TY-JM的cDNA文库构建第47-50页
　　　　· TY-JM总RNA质量分析第47-48页
　　　　3.2.2 合成ds cDNA的PCR最佳循环数的确定第48-49页
　　　　· cDNA片段化分级分离第49页
　　　　· 文库质量鉴定第49-50页
　　· 菌株TY-JM的EPSPS基因克隆第50-52页
　　· 菌株TZ1985的AROM基因同源序列的确定第52页
　　· TZ1985的AROM基因DNA片段扩增第52-55页
　　· 菌株TZ1985的EPSPS基因克隆第55-57页
　　· EPSPS基因序列分析第57-59页
　　· EPSPS基因原核表达研究第59-64页
　　　　· 制备带酶切位点的基因片段第59-60页
　　　　· 原核表达载体构建第60页
　　　　· 转化大肠杆菌及阳性克隆子检测第60-61页
　　　　· 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第61-62页
　　　　· 重组大肠杆菌草甘膦抗性的鉴定第62-64页
4 讨论第64-67页
　　· 抗草甘膦菌株TY-JM的分离鉴定第64页
　　· cDNA文库构建及文库质量鉴定第64-65页
　　· EPSPS基因的克隆与表达研究第65页
　　· EPSPS基因的进一步研究第65-67页
5 结论第67-68页
　　· 菌株TY-JM鉴定为假丝酵母菌第67页
　　· 成功构建了菌株TY-JM的cDNA文库第67页
　　· EPSPS基因的克隆与序列分析第67页
　　· TY-EPSPS和TZ-EPSPS具有抗草甘膦功能第67-68页
致谢第68-69页
参考文献第69-75页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第75 页

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