论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 根瘤菌共生固氮的分子过程 | 第12-14页 |
| 1.1.1 根瘤菌 | 第12页 |
| 1.1.2 固氮酶 | 第12-13页 |
| 1.1.3 根瘤的形成过程 | 第13-14页 |
| 1.2 豆科植物结瘤固氮的不同模式 | 第14-15页 |
| 1.2.1 传统的根瘤菌-豆科植物共生结瘤模式 | 第14页 |
| 1.2.2 依赖于T3SS的根瘤菌-豆科植物共生结瘤模式 | 第14-15页 |
| 1.2.3 不依赖NFs和T3SS的根瘤菌-豆科植物共生结瘤模式 | 第15页 |
| 1.3 根瘤菌分泌系统 | 第15-17页 |
| 1.3.1 根瘤菌III型分泌系统 | 第16-17页 |
| 1.3.2 根瘤菌IV型分泌系统 | 第17页 |
| 1.3.3 根瘤菌VI型分泌系统 | 第17页 |
| 1.4 根瘤菌T3SS效应蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5 根瘤菌T3SS效应蛋白的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6 A. caulinodans ORS571相关研究介绍 | 第19-20页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 A.caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白基因的预测、克隆与原核表达载体构建 | 第21-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 供试菌株和质粒载体 | 第21页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂配方 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 A. caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白编码基因预测与生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.2 A. caulinodans ORS571基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 A. caulinodans ORS571效应蛋白基因PCR引物的设计 | 第23页 |
| 2.2.4 A. caulinodans ORS571效应蛋白基因的克隆及纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备（TSS法） | 第25页 |
| 2.2.7 含有效应蛋白基因的重组表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.8 重组菌的鉴定 | 第27页 |
| 2.3 试验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 效应蛋白基因片段的克隆及生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 pMAL-c4X质粒的提取与双酶切 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组表达载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 A.caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白原核表达及纯化 | 第32-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 生化试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 试剂配方 | 第32-33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 重组质粒转化到表达菌株Rosetta (DE3) | 第33页 |
| 3.2.2 融合效应蛋白原核表达条件的优化 | 第33-34页 |
| 3.2.3 融合效应蛋白的可溶性分析 | 第34页 |
| 3.2.4 融合效应蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.5 融合效应蛋白的Western blot检测 | 第35页 |
| 3.3 试验结果 | 第35-39页 |
| 3.3.1 原核表达条件的优化 | 第35-36页 |
| 3.3.2 融合效应蛋白的可溶性分析 | 第36-37页 |
| 3.3.3 融合效应蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3.3.4 融合效应蛋白的Western blot鉴定 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 A.caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白多克隆抗体制备及鉴定 | 第40-45页 |
| 4.1 试验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第40页 |
| 4.1.2 生化试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 试剂配方 | 第40页 |
| 4.2 试验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 抗原的乳化及多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| 4.2.2 多克隆抗体的ELISA检测 | 第41页 |
| 4.2.3 A. caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| 4.2.4 A. caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3 试验结果 | 第42-43页 |
| 4.3.1 多克隆抗体的获得及效价的测定 | 第42页 |
| 4.3.2 A. caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白的诱导表达及检测 | 第42-43页 |
| 4.3.3 A. caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白的鉴定 | 第43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 A.caulinodans ORS571 T3SS效应蛋白AZC_2928 的相关功能分析 | 第45-52页 |
| 5.1 试验材料 | 第45页 |
| 5.1.1 供试菌株和质粒载体 | 第45页 |
| 5.1.2 供试植物 | 第45页 |
| 5.2 试验方法 | 第45-48页 |
| 5.2.1 效应蛋白AZC_2928 基因同源敲除片段的获得 | 第45-46页 |
| 5.2.2 敲除质粒pK18mobsacB的获得 | 第46页 |
| 5.2.3 效应蛋白AZC_2928 基因基因敲除载体的构建 | 第46-47页 |
| 5.2.4 效应蛋白AZC_2928 基因的敲除 | 第47-48页 |
| 5.2.5 植物回接试验 | 第48页 |
| 5.3 结果与分析 | 第48-50页 |
| 5.3.1 效应蛋白AZC_2928 基因敲除载体的构建及鉴定 | 第48-49页 |
| 5.3.2 A. caulinodans ORS571效应蛋白AZC_2928 基因敲除突变株的鉴定 | 第49页 |
| 5.3.3 植物回接试验 | 第49-50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 结论及后续研究设想 | 第52-54页 |
| 6.1 结论 | 第52页 |
| 6.2 后续研究设想 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-65页 |
| 缩略词 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
