论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 酵母双杂交系统 | 第9-15页 |
| 1.1.1 酵母双杂系统的原理 | 第9-10页 |
| 1.1.2 酵母双杂交系统的改进 | 第10-12页 |
| 1.1.3 酵母双杂交系统的发展 | 第12-14页 |
| 1.1.4 cDNA文库筛选 | 第14-15页 |
| 1.2 DELLA蛋白简介 | 第15-18页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 植株与菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 载体、工具酶及试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.4 常用试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 诱饵表达载体的构建 | 第21-25页 |
| 2.3 cDNA文库的筛选 | 第25-26页 |
| 2.3.1 酵母Y190感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 热激法转化Y190酵母感受态细胞 | 第25页 |
| 2.3.3 检测诱饵的自激活性 | 第25页 |
| 2.3.4 cDNA文库筛选 | 第25-26页 |
| 2.3.5 显色反应 | 第26页 |
| 2.3.6 互作蛋白的分析 | 第26页 |
| 2.4 候选蛋白与诱饵蛋白相互作用验证 | 第26-28页 |
| 2.4.1 AT5G21222和AT3G22750酵母双杂载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.4.2 AT5G21222和AT3G22750与GAI△N相互作用验证 | 第27-28页 |
| 2.5 T-DNA插入突变体纯合体的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.5.1 改良CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第28页 |
| 2.5.2 鉴定T-DNA插入突变纯合体 | 第28页 |
| 2.5.3 植物RNA提取试剂盒提取总RNA | 第28-29页 |
| 2.5.4 cDNA第一链合成 | 第29页 |
| 2.5.5 检测AT3G22750在T-DNA插入突变体中的表达情况 | 第29-30页 |
| 2.6 T-DNA插入突变体相应生理指标的测定 | 第30-31页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第31-44页 |
| 3.1 PIPE、GAI及RGA为诱饵的cDNA文库筛选 | 第31-39页 |
| 3.1.1 诱饵表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.1.2 诱饵转化酵母菌株并检测 | 第33-34页 |
| 3.1.3 诱饵菌株筛选cDNA文库 | 第34-39页 |
| 3.2 几个重要候选蛋白与诱饵蛋白相互作用的酵母双杂验证 | 第39-40页 |
| 3.3 AT5G21222和AT3G22750基因T-DNA插入突变体的筛选和鉴定 | 第40-44页 |
| 第四部分 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 RGA和GAI为诱饵的cDNA文库筛选中的自激活性 | 第44页 |
| 4.2 cDNA文库筛选是寻找特异性相互作用蛋白的一种快捷有效方法 | 第44-47页 |
| 小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
