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枝孢霉脂肪酶的定向进化
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枝孢霉脂肪酶的定向进化
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-9页
引言第9-10页
1 文献综述第10-30页
　　1.1 脂肪酶简介第10-13页
　　　　1.1.1 脂肪酶及其来源第10-11页
　　　　1.1.2 脂肪酶的催化特性第11-12页
　　　　1.1.3 脂肪酶的催化机理第12-13页
　　1.2 脂肪酶的应用第13-15页
　　　　1.2.1 食品工业第13-14页
　　　　1.2.2 制药工业第14页
　　　　1.2.3 洗涤剂工业第14-15页
　　　　1.2.4 生物柴油的制备第15页
　　1.3 蛋白质工程在脂肪酶改造中的应用第15-21页
　　　　1.3.1 提高热稳定性第17-18页
　　　　1.3.2 改变不同链长脂肪酸的选择性第18页
　　　　1.3.3 提高反式脂肪酸选择性第18-19页
　　　　1.3.4 提高抗氧化性第19页
　　　　1.3.5 提高酶活第19页
　　　　1.3.6 立体选择性第19-20页
　　　　1.3.7 提高甲醇耐受性第20页
　　　　1.3.8 提高表面活性剂耐受性第20-21页
　　1.4 定向进化的实验手段第21-27页
　　　　1.4.1 突变库的构建方法第21-24页
　　　　1.4.2 定向进化的筛选策略第24-27页
　　　　1.4.3 定点突变的方法第27页
　　1.5 毕赤酵母表达系统简介第27-28页
　　1.6 本课题的研究内容第28-30页
2 材料与方法第30-44页
　　2.1 实验材料第30-34页
　　　　2.1.1 基因、质粒与菌株第30页
　　　　2.1.2 PCR引物列表第30-32页
　　　　2.1.3 工具酶与试剂盒第32页
　　　　2.1.4 主要实验仪器第32页
　　　　2.1.5 主要生化试剂第32-33页
　　　　2.1.6 培养基与主要溶液第33-34页
　　2.2 实验方法第34-44页
　　　　2.2.1 确定易错PCR条件第34页
　　　　2.2.2 琼脂糖凝胶电泳第34页
　　　　2.2.3 PCR产物胶回收第34-35页
　　　　2.2.4 PCR产物和质粒的双酶切第35页
　　　　2.2.5 PCR产物和质粒的连接第35-36页
　　　　2.2.6 大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的制备第36页
　　　　2.2.7 重组质粒的转化第36页
　　　　2.2.8 质粒的提取第36-37页
　　　　2.2.9 毕赤酵母感受态细胞的制备第37页
　　　　2.2.10 重组质粒的酵母转化第37页
　　　　2.2.11 构建突变库第37-38页
　　　　2.2.12 初步筛选突变菌株第38页
　　　　2.2.13 平板法筛选耐甲醇突变株第38-39页
　　　　2.2.14 重组酵母的发酵第39页
　　　　2.2.15 SDS-PAGE蛋白电泳第39页
　　　　2.2.16 脂肪酶酶活测定方法第39-40页
　　　　2.2.17 筛选耐甲醇酶液第40页
　　　　2.2.18 测定酶的甲醇耐受性第40-41页
　　　　2.2.19 测定酶的表面活性剂耐受性第41页
　　　　2.2.20 测定其他酶学性质第41-42页
　　　　2.2.21 获取突变菌株基因并测序第42页
　　　　2.2.22 定点饱和突变第42-44页
3 实验结果第44-58页
　　3.1 易错PCR条件的确定第44页
　　3.2 突变库的构建与初步筛选第44-46页
　　3.3 耐甲醇突变株筛选结果第46页
　　3.4 突变脂肪酶#467的性质第46-49页
　　　　3.4.1 甲醇耐受性第47页
　　　　3.4.2 序列分析第47-49页
　　　　3.4.3 其他酶学性质第49页
　　3.5 突变脂肪酶#496的性质第49-58页
　　　　3.5.1 SDS耐受性第49-51页
　　　　3.5.2 突变株对其他表面活性剂的耐受性第51-53页
　　　　3.5.3 其他酶学性质第53-54页
　　　　3.5.4 突变序列分析第54-55页
　　　　3.5.5 饱和突变实验结果第55-58页
4 讨论与展望第58-61页
结论第61-62页
参考文献第62-68页
附录A 枝孢霉脂肪酶基因序列第68-69页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第69-70页
致谢第70-71页

本篇论文共71页，点击这进入下载页面。
 
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