论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 中英缩略语索引 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 吐温及其在氨基酸发酵中的应用 | 第11-12页 |
| 1.3 吐温诱导谷氨酸高产的机制 | 第12-16页 |
| 1.3.1 渗透模型 | 第12-13页 |
| 1.3.2 谷氨酸转运蛋白结构改变机制 | 第13-14页 |
| 1.3.3 谷氨酸合成网络的酶活调控机制 | 第14-16页 |
| 1.4 结论 | 第16-18页 |
| 第2章 Tween40对C.crenatum产L-Arg生理代谢的影响 | 第18-29页 |
| 2.1 前言 | 第18-19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 材料 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 相关试剂与培养基的配制 | 第20-21页 |
| 2.2.4 方法 | 第21-25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-28页 |
| 2.3.1 Tween40添加条件的优化 | 第25-26页 |
| 2.3.2 胞内ODHC酶活的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.3 胞内NADPH水平的测定 | 第27-28页 |
| 2.4 小结 | 第28-29页 |
| 第3章 dtsR1和farR基因缺失对C.crenatum产L-Arg生理代谢的影响 | 第29-51页 |
| 3.1 前言 | 第29-30页 |
| 3.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 | 第30-31页 |
| 3.2.2 培养基 | 第31-32页 |
| 3.2.3 试剂配制方法 | 第32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-40页 |
| 3.3.1 引物设计及合成 | 第32-33页 |
| 3.3.2 感受态细胞制备及转化过程 | 第33-34页 |
| 3.3.3 质粒DNA提取方法 | 第34-35页 |
| 3.3.4 DNA回收及纯化方法 | 第35-36页 |
| 3.3.5 打靶载体构建 | 第36-38页 |
| 3.3.6 同源重组过程和单、双交换重组子筛选方法 | 第38页 |
| 3.3.7 敲除株产L-Arg摇瓶发酵实验方法 | 第38-39页 |
| 3.3.8 单因素优化三种脂肪酸酯添加浓度 | 第39页 |
| 3.3.9 发酵各种生理指标的测定 | 第39-40页 |
| 3.3.10 显著性分析 | 第40页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第40-50页 |
| 3.4.1 基因敲除打靶载体构建 | 第40-41页 |
| 3.4.2 筛选双交换重组子 | 第41-42页 |
| 3.4.3 dtsR1基因缺失对C.crenatum产L-Arg生理代谢影响 | 第42-44页 |
| 3.4.4 不同脂肪酸酯添加对C.crenatum生理代谢影响 | 第44-49页 |
| 3.4.5 farR基因缺失对C.crenatum产L-Arg生理代谢影响 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第4章 脂肪酸酯对L-Arg生物合成途径中关键基因转录水平的影响 | 第51-63页 |
| 4.1 前言 | 第51-52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.2 培养基及菌株培养条件 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.3.1 引物设计及合成 | 第53页 |
| 4.3.2 样品制备 | 第53-54页 |
| 4.3.3 细菌总RNA的提取 | 第54-56页 |
| 4.3.4 细菌总RNA反转录 | 第56-57页 |
| 4.3.5 相关RT-qPCR反应程序及体系 | 第57页 |
| 4.3.6 数据统计 | 第57页 |
| 4.4 实验结果 | 第57-61页 |
| 4.4.1 Tween40和DtsR1蛋白抑制ODHC酶活机理的初步探讨 | 第57-58页 |
| 4.4.2 不同脂肪酸酯诱导NADPH生成机理的初步探讨 | 第58-60页 |
| 4.4.3 FarR调控L-Arg生物合成途径机理的初步探讨 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-66页 |
| 5.1 结论 | 第63-64页 |
| 5.1.1 Tween40添加和DtsR1缺失实现L-Arg高产 | 第63页 |
| 5.1.2 脂肪酸酯添加诱导NADPH生成 | 第63-64页 |
| 5.1.3 脂肪酸酯添加影响相关基因的表达水平 | 第64页 |
| 5.2 展望 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 个人介绍 | 第74页 |
| 获奖情况 | 第74页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第74页 |
