论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| · 植物寄生线虫及马铃薯腐烂茎线虫简介 | 第12-14页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫分类地位及形态特征 | 第12-13页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫的发生分布和经济重要性 | 第13页 |
| · 传播途径及危害症状 | 第13-14页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫致病机理 | 第14页 |
| · 植物寄生线虫纤维素酶基因研究进展 | 第14-18页 |
| · 纤维素酶基因研究简介 | 第14-15页 |
| · 植物寄生线虫内切葡聚糖酶基因结构及编码蛋白特点 | 第15-16页 |
| · 植物寄生线虫内切葡聚糖酶基因表达分析 | 第16页 |
| · 植物寄生线虫内切葡聚糖酶基因来源及进化 | 第16-17页 |
| · eng 基因在线虫寄生过程中的作用 | 第17-18页 |
| · 线虫中RNAi 的机制 | 第18-21页 |
| · dsRNA 导入方式 | 第19页 |
| · 影响RNAi 反应的条件 | 第19-20页 |
| · RNAi 的持久性 | 第20-21页 |
| · 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| · 目的 | 第21页 |
| · 意义 | 第21-22页 |
| 第二章 马铃薯腐烂茎线虫eng基因克隆、结构分析及 原核表达 | 第22-53页 |
| · 材料和方法 | 第22-38页 |
| · 供试材料 | 第22页 |
| · 主要试剂和酶类 | 第22页 |
| · 培养基 | 第22页 |
| · cDNA 的合成 | 第22-24页 |
| · 目的基因片段的克隆 | 第24-25页 |
| · RACE 扩增获得全长cDNA | 第25-30页 |
| · 序列生物信息学分析 | 第30-31页 |
| · eng 基因内含子的扩增 | 第31-32页 |
| · eng 基因的Southern 杂交 | 第32-35页 |
| · Dd-eng-2 基因的原核表达 | 第35-38页 |
| · 结果与分析 | 第38-51页 |
| · RNA 的提取结果 | 第38-39页 |
| · 目的基因片段的克隆 | 第39页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫内切葡聚糖酶基因Dd-eng-1 全长cDNA 的克隆 | 第39-41页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫内切葡聚糖酶基因Dd-eng-2 全长cDNA 的克隆 | 第41-43页 |
| · 生物信息学分析 | 第43-47页 |
| · 基因内含子扩增结果与分析 | 第47-49页 |
| · 基因的Southern 结果与分析 | 第49-51页 |
| · 原核表达及表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第51页 |
| · 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 马铃薯腐烂茎线虫eng基因表达时间和空间 及酶活性分析 | 第53-64页 |
| · 材料与仪器 | 第53页 |
| · 实验材料 | 第53页 |
| · 试剂及仪器 | 第53页 |
| · 实验方法 | 第53-59页 |
| · 原位杂交分析 | 第53-57页 |
| · 半定量PCR 分析 | 第57-59页 |
| · 酶活力测定 | 第59页 |
| · 结果与分析 | 第59-62页 |
| · 探针标记 | 第59-60页 |
| · 原位杂交结果 | 第60页 |
| · 不同虫态的RNA 提取 | 第60-61页 |
| · 半定量PCR分析eng表达时间 | 第61页 |
| · 纤维素酶活力检测 | 第61-62页 |
| · 小结和讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 RNAi介导的马铃薯腐烂茎线虫eng基因功能验证 | 第64-76页 |
| · 材料与方法 | 第64-69页 |
| · 供试材料 | 第64页 |
| · 主要试剂和酶类 | 第64页 |
| · 主要仪器 | 第64页 |
| · DdENG基因dsRNA的合成 | 第64-66页 |
| · 马铃薯腐烂茎线虫的RNAi 实验 | 第66-67页 |
| · Real Time PCR检测DdENG转录水平 | 第67-69页 |
| · 体外RNAi 处理后线虫的侵染实验 | 第69页 |
| · 结果与分析 | 第69-74页 |
| · dsRNA 的合成 | 第69-70页 |
| · 体外刺激体系初步建立 | 第70页 |
| · 体外干涉优化 | 第70-71页 |
| · 体外干涉后eng 基因转录水平检测 | 第71-74页 |
| · 体外RNAi 处理后线虫的侵染实验 | 第74页 |
| · 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简介 | 第87页 |
