论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 研究综述 | 第11-19页 |
| 1 猪瘟病毒 | 第11-16页 |
| · 猪瘟病毒分子生物学特征 | 第11-14页 |
| · CSFV 基因组编码的结构蛋白及其功能 | 第11-12页 |
| · CSFV 基因组编码的非结构蛋白及功能 | 第12-13页 |
| · 非编码区及特性 | 第13页 |
| · CSFV 基因分型 | 第13-14页 |
| · 猪瘟流行病学状况 | 第14页 |
| · 常用的猪瘟疫苗 | 第14-15页 |
| · 猪瘟标记疫苗 | 第14页 |
| · 猪瘟弱毒疫苗 | 第14-15页 |
| · 猪瘟实验室诊断技术 | 第15-16页 |
| · CSFV 常规实验室诊断技术 | 第15-16页 |
| · CSFV 分子诊断技术 | 第16页 |
| · 猪瘟野毒株与疫苗株的鉴别诊断 | 第16页 |
| 2 高分辨率溶解曲线 | 第16-18页 |
| · 适用于 HRM 的染料和仪器 | 第17页 |
| · HRM 的运用 | 第17-18页 |
| 3 本研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 猪瘟野毒株分离鉴定及与疫苗株 HRM 鉴别诊断 | 第19-44页 |
| 1 材料 | 第19-22页 |
| · 病料的收集 | 第19页 |
| · 主要试验试剂 | 第19-20页 |
| · 宿主菌和质粒载体 | 第20页 |
| · 试验所需溶液的配置 | 第20页 |
| · 主要试验器材 | 第20-21页 |
| · 参考的基因序列 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-27页 |
| · HRM 在线模拟和引物设计 | 第22-23页 |
| · 血液、组织中病毒核酸的提取 | 第23页 |
| · 反转录和 PCR 扩增 | 第23-24页 |
| · RNA 反转录 | 第23页 |
| · PCR 扩增反应 | 第23-24页 |
| · 目的片段的克隆 | 第24-26页 |
| · PCR 产物的回收 | 第24页 |
| · 目的片段与 pMD-18T 克隆载体的连接 | 第24页 |
| · TOP10 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| · 重组质粒的转化 | 第25页 |
| · 阳性菌落的筛选、鉴定 | 第25页 |
| · 重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| · 目的片段测序和序列分析 | 第26页 |
| · CSFV 野毒株与疫苗株 HRM 分析 | 第26-27页 |
| · 野毒株与疫苗株 3′UTR 基因 HRM 溶解曲线分析 | 第26页 |
| · 特异性试验分析 | 第26页 |
| · 敏感性试验分析 | 第26页 |
| · 重复性试验分析 | 第26-27页 |
| · 野毒株与疫苗株混合感染模拟 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-42页 |
| · NS5B 和 3′UTR 区域 PCR 扩增结果 | 第27-29页 |
| · NS5B 区域 PCR 扩增结果 | 第27-28页 |
| · 猪瘟 3′UTR 区域 PCR 扩增结果 | 第28-29页 |
| · CSFV 测序序列和代表株的 NS5B 基因分析 | 第29-32页 |
| · NS5B 基因相似性分析 | 第29-31页 |
| · NS5B 基因遗传进化分析 | 第31-32页 |
| · CSFV 3′UTR 基因部分序列的分析 | 第32-33页 |
| · CSFV 病毒分离株与疫苗株 HRM 分析 | 第33-37页 |
| · 病毒分离株和疫苗株 HRM 鉴别分析 | 第33-37页 |
| · PCR-HRM 敏感性分析 | 第37页 |
| · CSFV 3′UTR 区特异序列 HRM 模拟分析 | 第37-39页 |
| · 参考株与实验分离株模拟曲线分析 | 第37-38页 |
| · HRM 动力模拟曲线分析 | 第38-39页 |
| · 野毒株与疫苗株混合感染模拟 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| · 猪瘟分离株基因序列特征 | 第42页 |
| · 猪瘟野毒株与疫苗弱毒株的 HRM 鉴别 | 第42-43页 |
| · 猪瘟 HRM 模拟分析 | 第43页 |
| · 猪瘟野毒株与疫苗弱毒株混合感染分析 | 第43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第三章 HRM 分析方法中不同核酸片段、染料和仪器的比较 | 第44-52页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| · 试验材料 | 第44页 |
| · 试验试剂与样品 | 第44页 |
| · 主要试验器材 | 第44页 |
| · RNA 病毒（CSFV 和 ALV）反转录 | 第44页 |
| · 质粒的构建 | 第44页 |
| · 溶解曲线在线模拟 | 第44-45页 |
| · 不同扩增片段的 PCR-HRM 方法建立 | 第45页 |
| · 不同染料的 HRM 比较 | 第45页 |
| · 不同仪器之间的 HRM 比较 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-49页 |
| · PCR 扩增产物凝胶电泳结果 | 第45-46页 |
| · 核酸序列熔解曲线模拟结果 | 第46-47页 |
| · 不同染料和扩增片段对 HRM 结果的影响 | 第47-49页 |
| · 不同仪器对 HRM 结果的影响 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| · 不同扩增片段对 HRM 分析的影响 | 第49-50页 |
| · 不同核酸染料对 HRM 分析的影响 | 第50-51页 |
| · 不同仪器对 HRM 分析影响 | 第51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58
页 |
