变色栓菌漆酶同工酶基因克隆表达及其在染料脱色中的应用



变色栓菌漆酶同工酶基因克隆表达及其在染料脱色中的应用

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变色栓菌漆酶同工酶基因克隆表达及其在染料脱色中的应用

论文目录
致谢	第1-4页
摘要	第4-6页
Abstract	第6-12页
前言	第12-14页
·课题研究的目的和意义	第12页
·课题研究的主要内容	第12-13页
·课题研究创新点	第13-14页
第一章绪论	第14-28页
· 漆酶的概述	第14-18页
· 漆酶的来源	第14页
· 漆酶的理化性质及结构特点	第14-16页
· 漆酶的催化机制	第16-18页
· 漆酶的生物学特性	第18页
· 漆酶的分子生物学研究进展	第18-22页
· 漆酶基因的克隆及表达	第18-20页
· 漆酶基因的结构和组织分析	第20页
· 漆酶基因的改造	第20-22页
· 巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统	第22-24页
· 毕赤酵母表达外源蛋白的优点	第22页
· 表达载体	第22-23页
· 宿主菌株	第23页
· 影响外源基因在毕赤酵母中稳定高效表达的因素	第23-24页
· 漆酶的应用研究进展	第24-28页
· 环境保护中的应用	第24-25页
· 生物修复	第25-26页
· 造纸工业中的应用	第26页
· 农产品加工业中的应用	第26页
· 医药行业中的应用	第26页
· 漆酶与能源利用	第26-28页
第二章变色栓菌漆酶基因的克隆	第28-46页
· 实验材料	第28-30页
· 菌株及质粒	第28页
· 药品与酶	第28页
· 培养基与主要试剂的配置	第28-30页
· 主要仪器	第30页
· 实验方法	第30-36页
· 种子活化	第30页
· 种子摇瓶培养	第30页
· 变色栓菌总 RNA 的提取	第30-31页
· 引物设计	第31页
· 将 mRNA 反转录为 cDNA 一链	第31-32页
· 变色栓菌漆酶基因的克隆	第32-33页
· 琼脂糖凝胶核酸电泳	第33页
· 目的片段的回收	第33页
· DNA 浓缩	第33-34页
· PCR 产物 TA 克隆	第34页
· 重组质粒转化大肠杆菌	第34页
· 质粒小量提取	第34-35页
· 重组质粒的 PCR 验证	第35-36页
· 目的基因的全序列测定	第36页
· 结果与分析	第36-45页
· 总 RNA 提取	第36-37页
· 全序列的获得	第37页
· 全阳性克隆子的筛选与鉴定	第37-38页
· 核苷酸序列及同源性分析	第38-45页
· 小结	第45-46页
第三章变色栓菌漆酶基因在毕赤酵母中的表达	第46-63页
· 实验材料	第46-48页
· 菌株及质粒	第46页
· 药品与酶	第46-47页
· 培养基及主要试剂配制	第47-48页
· 主要仪器	第48页
· 实验方法	第48-54页
· 引物设计	第48页
· 目的基因的 PCR 扩增	第48-49页
· PCR 扩增产物的割胶回收	第49页
· 目的基因的双酶切	第49页
· 表达载体的双酶切	第49-50页
· 表达质粒的构建	第50页
· 感受态细胞 TOP10F’的制备与转化	第50页
· 重组质粒的筛选	第50页
· 重组质粒的大量提取	第50-51页
· 重组质粒的线性化	第51页
· 毕赤酵母超级感受态细胞制备	第51-52页
· 毕赤酵母的电击转化	第52页
· 酵母重组子的筛选	第52页
· 重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达	第52页
· 毕赤酵母工程菌蛋白的 SDS-PAGE 电泳	第52-53页
· 漆酶活力测定	第53-54页
· 漆酶酶学性质	第54页
· 结果与分析	第54-62页
· 漆酶基因的 PCR 扩增	第54页
· 漆酶基因及表达载体的双酶切	第54-55页
· 漆酶基因与表达载体的连接和阳性表达质粒的筛选	第55页
· 重组质粒的大量提取及表达载体线性化	第55-56页
· 酵母的电击转化	第56页
· 重组酵母阳性筛选	第56-57页
· 重组变色栓菌漆酶在不同毕赤酵母中的诱导表达	第57-58页
· 毕赤酵母工程菌蛋白的电泳	第58页
· 酶学性质	第58-62页
· 小结	第62-63页
第四章漆酶基因的定向改造及其高效表达	第63-81页
· 实验材料	第63-64页
· 菌株及质粒	第63页
· 药品与酶	第63页
· 培养基及主要试剂配制	第63-64页
· 主要仪器	第64页
· 实验方法	第64-71页
· 引物设计	第64-65页
· 改造依据	第65-66页
· 定点突变	第66-67页
· 突变后的重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达	第67页
· 单因素对表达的影响	第67-68页
· 多因素对表达的影响	第68-69页
· 高密度发酵产漆酶	第69-71页
· 结果与分析	第71-80页
· 不同信号肽	第71-72页
· 添加增强子结果	第72-73页
· 单因素对表达的影响	第73-77页
· 多因素对表达的影响[72-74]	第77-79页
· 高密度发酵的结果	第79-80页
· 小结	第80-81页
第五章变色栓菌漆酶在染料脱色中的应用	第81-95页
· 实验材料	第81-82页
· 菌株及质粒	第81页
· 实验药品	第81页
· 培养基及主要试剂配制	第81-82页
· 主要仪器	第82页
· 实验方法	第82-84页
· 酶液的制备	第82页
· 漆酶酶活测定	第82-83页
· 不同底物下的漆酶的最适温度与最适 pH	第83页
· 米氏常数测定	第83页
· 降解的反应体系	第83-84页
· 结果与分析	第84-94页
· 变色栓菌漆酶在不同底物下的最适反应温度及最适 pH	第84-85页
· 重组变色栓菌漆酶同工酶动力学常数测定	第85页
· 重组变色栓菌漆酶同工酶对对苯二酚的降解	第85-88页
· 重组变色栓菌漆酶同工酶对染料的脱色	第88-94页
· 小结	第94-95页
第六章漆酶 lacA 基因与木聚糖酶 xynB 基因在毕赤酵母中的融合表达	第95-111页
· 实验材料	第95-96页
· 菌株及质粒	第95页
· 药品与酶	第95页
· 培养基与主要试剂的配置	第95-96页
· 主要仪器	第96页
· 实验方法	第96-101页
· 单因素对木聚糖酶表达的影响	第96页
· 引物设计	第96-97页
· 克隆方案	第97-99页
· 表达质粒的构建	第99页
· 表达质粒的转化与筛选	第99页
· 表达质粒的线性化、电击转化	第99页
· 酵母重组子的筛选及诱导表达	第99-100页
· 木聚糖酶酶活与漆酶酶活的测定	第100-101页
· 结果与分析	第101-110页
· 木聚糖酶表达条件的优化	第101-103页
· 木聚糖酶基因 xynB 及漆酶基因 lacA 的 PCR 扩增	第103页
· 通过连接肽的顺序融合木聚糖酶基因 xynB 及漆酶基因 lacA	第103-104页
· 全阳性克隆子的筛选与鉴定	第104-108页
· 融合基因及表达载体的双酶切	第108页
· 重组质粒的大量提取及表达载体线性化	第108-109页
· 酵母的电击转化	第109页
· 重组酵母阳性筛选	第109页
· 重组变色栓菌漆酶在不同毕赤酵母中的诱导表达	第109-110页
· 小结	第110-111页
第七章结论与展望	第111-118页
· 结论	第111-112页
· 讨论与展望	第112-118页
参考文献	第118-124页
攻读学位期间发表的学术论文	第124 页

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