小菜蛾精氨酸激酶基因dsRNA在大肠杆菌中的表达及其效应



小菜蛾精氨酸激酶基因dsRNA在大肠杆菌中的表达及其效应

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小菜蛾精氨酸激酶基因dsRNA在大肠杆菌中的表达及其效应

论文目录
摘要	第1-9页
Abstract	第9-11页
1 前言	第11-22页
· 小菜蛾及防治	第11-14页
· 小菜蛾及生活史	第11页
· 小菜蛾的防治及抗性	第11-14页
· 精氨酸激酶简介	第14-16页
· 精氨酸激酶	第14-15页
· 精氨酸激酶基的蛋白性质	第15-16页
· RNA 干扰简介	第16-21页
· RNA 干扰的分子机制	第16-18页
· siRNA 的来源	第18页
· 昆虫的 RNAi	第18-21页
· 研究目的	第21页
· 研究内容和技术路线	第21-22页
· 研究内容	第21-22页
· 技术路线	第22页
2 材料、试剂及仪器	第22-24页
· 供试昆虫	第22-23页
· 试剂	第23-24页
· 培养基配制	第24页
· 仪器	第24页
3 试验方法	第24-36页
· 实时荧光定量 PCR 检测精氨酸激酶的表达量	第24-27页
· 荧光定量 PCR 样品制备	第24-26页
· 实时荧光定量 PCR 的标准曲线构建	第26-27页
· SYBR GreenⅠ定量 PCR 反应条件	第27页
· 引物设计及目的片段的合成	第27-28页
· 荧光定量 PCR 需要的引物	第27-28页
· 构建 dsRNA 表达载体的引物	第28页
· 检测载体 RNAi 元件结构完整性的引物	第28页
· PCR 扩增目的基因	第28-29页
· 感受态大肠杆菌 JM109（CaCl2法）的制备及热击转化	第29-30页
· 大肠杆菌转化子的筛选与检测	第30-31页
· DNA 产物的凝胶回收	第31-32页
· 大肠杆菌质粒 DNA 提取	第32-33页
· dsRNA 表达载体的构建	第33-34页
· 表达载体转化大肠杆菌 HT115	第34页
· dsRNA 的诱导表达	第34-35页
· 大肠杆菌 RNA 的提取	第35-36页
· 喂饲试验及 RNAi 效应检测	第36页
· RT-PCR 分析干扰效果	第36页
4 结果与分析	第36-54页
· 小菜蛾幼虫总 RNA 的提取	第36-37页
· 精氨酸激酶表达量分析	第37-42页
· 目的基因和内参基因克隆以及引物特异性分析	第37-38页
· 定量 PCR 的特异性分析	第38-39页
· 实时荧光定量 PCR 的标准曲线	第39-41页
· 精氨酸激酶基因周期表达分析	第41-42页
· 载体构建及其验证	第42-45页
· 构建载体的精氨酸激酶基因的片段的克隆	第42-44页
· 克隆载体的验证	第44-45页
· 大肠杆菌表达载体的验证	第45-47页
· 转化结果的验证以及 dsRNA 的诱导表达	第47-48页
· 喂饲试验以及 RNAi 效应分析	第48-54页
· 喂饲试验结果	第48-52页
· RNAi 效应分析	第52-54页
5 讨论	第54-56页
6 后续研究工作的展望	第56-57页
参考文献	第57-63页
附录	第63-66页
致谢	第66页

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