论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-26页 |
| · 生物体中抗氧化的意义 | 第10页 |
| · 人体的抗氧化体系 | 第10-12页 |
| · 超氧化物歧化酶 | 第11页 |
| · 过氧化氢酶 | 第11-12页 |
| · 硫氧还蛋白 | 第12页 |
| · 谷胱甘肽系统 | 第12页 |
| 1.3 Peroxiredoxin 家族 | 第12-16页 |
| 1.3.1 Peroxiredoxin 家族简介 | 第12-15页 |
| 1.3.2 Peroxiredoxin 生理功能简介 | 第15-16页 |
| 1.4 Prx1 简介 | 第16-18页 |
| 1.4.1 Prx1 结构 | 第16-17页 |
| 1.4.2 Prx1 与信号传导 | 第17页 |
| 1.4.3 Prx1 与细胞增殖 | 第17页 |
| 1.4.4 Prx1 与肿瘤发生 | 第17-18页 |
| 1.4.5 Prx1 活性的调节 | 第18页 |
| 1.5 Prx2 简介 | 第18-22页 |
| 1.5.1 Prx2 的结构及定位 | 第18-19页 |
| 1.5.2 Prx2 抗氧化功能及机制 | 第19页 |
| 1.5.3 Prx2 蛋白活性调节 | 第19-20页 |
| 1.5.4 Prx2 的其它生理功能 | 第20-21页 |
| 1.5.5 Prx2 在疾病诊断和治疗方面的意义 | 第21-22页 |
| · 本论文研究的目的、主要内容和意义 | 第22-23页 |
| · 技术路线 | 第23-26页 |
| 第二章 表达载体 pET28-Prx1 和 pET28-Prx2 的构建 | 第26-37页 |
| · 引言 | 第26页 |
| · 实验材料与仪器 | 第26-28页 |
| · 菌种，质粒及引物 | 第26-27页 |
| · 仪器设备 | 第27页 |
| · 主要试剂 | 第27页 |
| · 培养基，抗生素以及常用溶液的配制 | 第27-28页 |
| · 方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 Prx1 和 Prx2 目的基因 PCR 扩增 | 第28-30页 |
| 2.3.2 PCR 扩增产物与 pET28 载体的双酶切与连接 | 第30-32页 |
| · 转化 | 第32页 |
| 2.3.4 pET28-Prx1 和 pET28-Prx2 重组质粒的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.3.4.1 菌液 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| · 双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| · 转化 | 第34页 |
| 2.3.6 挑选阳性克隆，菌液 PCR 验证 | 第34页 |
| · 结果 | 第34-36页 |
| 2.4.1 Prx1 和 Prx2 目的基因扩增结果 | 第34-35页 |
| 2.4.2 菌液 PCR 鉴定图 | 第35-36页 |
| 2.4.3 重组质粒 pET28-Prx1 和 pET28-Prx2 双酶切鉴定结果 | 第36页 |
| · 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 重组人 Prx1 和 2 的表达、纯化及鉴定 | 第37-51页 |
| · 材料 | 第37-40页 |
| · 菌种和质粒 | 第37页 |
| · 仪器设备 | 第37-38页 |
| · 主要试剂 | 第38页 |
| · 常用溶液的配制 | 第38-40页 |
| · 实验方法 | 第40-44页 |
| · 小量表达及表达条件优化 | 第40-41页 |
| · 大量表达及亲和层析纯化 | 第41-42页 |
| · 纯化蛋白脱盐 | 第42页 |
| 3.2.4 Western Blot 鉴定 | 第42-44页 |
| · 结果 | 第44-50页 |
| 3.3.1 Prx1 和 2 小量表达及诱导表达条件优化 | 第44-47页 |
| · 亲和层析纯化结果 | 第47-49页 |
| 3.3.3 Prx1 和 2 纯化蛋白脱盐结果 | 第49-50页 |
| 3.3.4 Western Blotting 鉴定结果 | 第50页 |
| · 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 Prx1 和 Prx2 的抗氧化功能研究 | 第51-62页 |
| · 引言 | 第51-52页 |
| · 材料 | 第52-53页 |
| · 蛋白，质粒及细胞 | 第52页 |
| · 仪器设备 | 第52页 |
| · 主要试剂 | 第52页 |
| · 常用溶液配制 | 第52-53页 |
| · 方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 硫氰酸铁法测 Prx 蛋白催化 H2O2的反应活性 | 第53页 |
| · 质粒保护实验 | 第53页 |
| 4.3.3 Prx1 和 Prx2 保护 NIH/3T3 细胞免受紫外损伤 | 第53-54页 |
| 4.3.4 细胞 ROS 检测 | 第54-55页 |
| · 结果 | 第55-60页 |
| 4.4.1 Prx1 和 Prx2 催化 H2O2反应活性 | 第55-57页 |
| 4.4.2 Prx2 保护质粒 DNA 免受氧化损伤 | 第57-58页 |
| 4.4.3 Prx2 保护 NIH/3T3 细胞免受紫外损伤 | 第58-60页 |
| · 讨论 | 第60-61页 |
| · 本章小结 | 第61-62页 |
| 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72
页 |
