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用毕赤酵母系统表达XA21-LRR及其糖基化的初步研究
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用毕赤酵母系统表达XA21-LRR及其糖基化的初步研究
论文目录
 
1 引言第1-13 页
　　· 研究意义第9-10 页
　　· 细胞膜糖蛋白的信号识别作用第10-11 页
　　· 毕赤酵母表达系统的优点第11-13 页
2 材料和方法第13-27 页
　　· 试验材料第13-17 页
　　　　· 质粒和菌株第13 页
　　　　· 工具酶、主要试剂及用品第13 页
　　　　· 仪器与设备第13-14 页
　　　　· 试剂配制第14-17 页
　　　　　　· 毕赤酵母表达常用母液及缓冲液配制第14 页
　　　　　　· 毕赤酵母表达培养基配制第14-15 页
　　　　　　· 冻融法制备毕赤酵母基因组DNA第15 页
　　　　　　· Western Blot所用试剂第15-17 页
　　· 试验方法第17-27 页
　　　　· 载体选择和引物设计第17-18 页
　　　　　　· 载体的选择第17 页
　　　　　　· 引物设计第17-18 页
　　　　· 目的基因的获得与纯化第18-19 页
　　　　　　· PCR扩增目的片段第18-19 页
　　　　　　· PCR产物纯化第19 页
　　　　· 载体和目的片段的酶切与连接反应第19-21 页
　　　　　　· PCR产物和载体pPIC9K酶切第19 页
　　　　　　· 质粒载体酶切第19-20 页
　　　　　　· 载体去磷酸化第20 页
　　　　　　· 载体脱磷效率检测第20-21 页
　　　　　　· 目的片段与载体连接第21 页
　　　　· 连接产物的转化第21-22 页
　　　　　　· 细菌电击感受态细胞的制备第21 页
　　　　　　· 连接产物的电击转化第21-22 页
　　　　· 重组质粒的鉴定第22 页
　　　　· 重组质粒的测序分析第22 页
　　　　· 转化毕赤酵母第22-23 页
　　　　　　· 用于酵母化学转化法感受态细胞的制备第22-23 页
　　　　　　· 重组载体的酶切第23 页
　　　　　　· 转化毕赤酵母第23 页
　　　　· 用PCR方法验证重组载体第23-24 页
　　　　· 重组基因在酵母中的小量诱导表达第24-25 页
　　　　· 表达产物的分析与鉴定第25-26 页
　　　　　　· 表达产物的SDS-PAGE分析第25 页
　　　　　　· 表达产物的Western-blot鉴定第25-26 页
　　　　· 表达产物的糖苷酶处理及糖链鉴定第26-27 页
3 结果与分析第27-36 页
　　· 目的基因的扩增第27 页
　　· 重组载体构建的鉴定第27-29 页
　　　　· 重组载体构建理论分析第27-28 页
　　　　· 鉴定目的片段插入的正确方向第28-29 页
　　　　· 重组载体构建结果第29 页
　　· 重组载体的测序及结果分析第29-30 页
　　· 重组载体在毕赤酵母基因组的整合情况鉴定第30-33 页
　　　　· MD平板筛选重组转化子第30 页
　　　　· YPD-G418筛选高拷贝重组转化子第30 页
　　　　· PCR鉴定重组转化子第30-33 页
　　· 重组蛋白的诱导表达及鉴定第33-34 页
　　　　· SDS-PAGE检测目的蛋白表达第33 页
　　　　· Western Blot检测目的蛋白表达第33-34 页
　　· 重组蛋白的糖链分析第34-36 页
4 讨论第36-40 页
　　· 信号肽识别位点的设计第36 页
　　· PCR产物酶切保护碱基的设计第36-37 页
　　· 密码子的偏好性原则第37 页
　　· 目的蛋白表达量低的原因及提高表达水平的措施第37-38 页
　　· HIS标签的作用第38-39 页
　　· LRR区糖蛋白分析第39-40 页
5 结论第40-41 页
参考文献第41-45 页
附录第45-48 页
在读期间发表的学术论文第48-49 页
作者简历第49-50 页
致谢第50-51 页
中国农学通报第51-58页

本篇论文共58页，点击这进入下载页面。
 
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