论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6
页 |
| Abstract | 第6-8
页 |
| 缩略语/符号说明 | 第8-12
页 |
| 前言 | 第12-17
页 |
| 研究现状、成果 | 第12-15
页 |
| 研究目的、方法 | 第15-17
页 |
| 一、突变型与经典型Ad-shmiR-221/222共表达腺病毒载体的构建及其鉴定 | 第17-43
页 |
| · 引言 | 第17-18
页 |
| · 对象和方法 | 第18-30
页 |
| · 仪器和试剂 | 第18-19
页 |
| · shRNA的靶序列的选择 | 第19
页 |
| · shRNA表达框的设计与合成 | 第19-20
页 |
| · 将shRNA表达框亚克隆至相应的腺病毒穿梭质粒上 | 第20-23
页 |
| · 将两个腺病毒穿梭质粒融合以产生shRNA的共表达框 | 第23-25
页 |
| · 从pGenesil-Co上通过LR体外同源重组将shmiR-221和shmiR-222的共表达框移至pGSadeno腺病毒表达载体上 | 第25-26
页 |
| · 包装重组腺病毒 | 第26-28
页 |
| · 重组腺病毒的扩增提取与滴度测定 | 第28-30
页 |
| · 结果 | 第30-37
页 |
| · 腺病毒穿梭质粒鉴定结果 | 第30-32
页 |
| · 重组腺病毒载体鉴定结果 | 第32-34
页 |
| · 包装后荧光验证重组腺病毒的产生 | 第34-35
页 |
| · 重组腺病毒的扩增提取与滴度测定 | 第35-37
页 |
| · 讨论 | 第37-42
页 |
| · 小结 | 第42-43
页 |
| 二、突变型与经典型Ad-shmiR-221/222共表达腺病毒载体在LN229和U251胶质瘤细胞中共调控miR-221和miR-222的表达和功能的体外研究 | 第43-81
页 |
| · 引言 | 第43-45
页 |
| · 对象和方法 | 第45-57
页 |
| · 仪器和试剂 | 第45-46
页 |
| · 细胞培养 | 第46-47
页 |
| · 实验分组及重组腺病毒载体转导 | 第47
页 |
| · miRNA实时荧光定量PCR | 第47-50
页 |
| · Western blot检测相关蛋白的表达 | 第50-55
页 |
| · 流式细胞术分析细胞周期 | 第55-56
页 |
| · 倒置相差显微镜观察形态 | 第56
页 |
| · Caspase-3/7萤光素酶法检测细胞凋亡 | 第56-57
页 |
| · 结果 | 第57-74
页 |
| · 加入氯仿后细胞裂解物分为三相 | 第57
页 |
| · 微量紫外/可见分光光度计测定总RNA的浓度 | 第57-58
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳观察总RNA | 第58
页 |
| · 微量紫外/可见分光光度计测定cDNA的浓度 | 第58-59
页 |
| · 琼脂糖凝胶电泳观察cDNA | 第59-60
页 |
| · miRNA实时荧光定量PCR | 第60-63
页 |
| · Western blot检查miR-221/222目的蛋白的表达 | 第63-69
页 |
| · 流式细胞术分析细胞周期 | 第69-71
页 |
| · 倒置相差显微镜观察形态 | 第71-72
页 |
| · Caspase-3/7萤光素酶法检测细胞凋亡 | 第72-74
页 |
| · 讨论 | 第74-80
页 |
| · 小结 | 第80-81
页 |
| 三、生物信息学分析突变型与经典型Ad-shmiR-221/222共表达腺病毒载体多层次半定量调控机制 | 第81-88
页 |
| · 引言 | 第81-82
页 |
| · 对象和方法 | 第82
页 |
| · 结果 | 第82-86
页 |
| · 确定shRNA引导链与靶miRNA形成的复合体的最佳三维结构 | 第82-85
页 |
| · 检测shRNA引导链与靶miRNA形成的复合体的热力学稳定性 | 第85-86
页 |
| · 讨论 | 第86-87
页 |
| · 小结 | 第87-88
页 |
| 结论 | 第88-89
页 |
| 参考文献 | 第89-93
页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第93-94
页 |
| 综述 | 第94-103
页 |
| miRNA与胶质瘤发病机制 | 第94-99
页 |
| 综述参考文献 | 第99-103
页 |
| 致谢 | 第103
页 |
