论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 干扰素研究概况 | 第12-21页 |
| 1 干扰素的分类及特征分析 | 第12-13页 |
| 2 IFN生物学活性及其机制的研究进展 | 第13-18页 |
| · IFN生物学活性的研究进展 | 第13-14页 |
| · IFN受体研究概况 | 第14-15页 |
| · IFN抗病毒活性机制的研究概况 | 第15-18页 |
| · PKR研究概况 | 第15-16页 |
| · OAS和RNase L研究概况 | 第16-17页 |
| · ADAR和Mx蛋白研究概况 | 第17-18页 |
| 3 IFN在临床中的应用 | 第18页 |
| 4 禽类干扰素的研究概况 | 第18-20页 |
| 5. 选题目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 天府肉鹅IFN-α基因克隆表达及抗病毒活性的研究 | 第21-57页 |
| 1 材料 | 第21-25页 |
| · 菌株及表达载体 | 第21页 |
| · 毒株及细胞 | 第21页 |
| · 实验动物 | 第21-22页 |
| · 主要试剂及配制 | 第22-24页 |
| · LB液体培养基 | 第22页 |
| · SDS-PAGE电泳相关液体 | 第22-23页 |
| · Western-blot相关试剂 | 第23页 |
| · 细胞培养的相关溶液配制 | 第23-24页 |
| · 透析复性相关试剂 | 第24页 |
| · Ni-IMAC复性相关试剂 | 第24页 |
| · 主要实验仪器设备 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-40页 |
| · RT-PCR扩增天府肉鹅IFN-α基因 | 第25-26页 |
| · 引物设计 | 第25页 |
| · 天府肉鹅淋巴细胞培养以及总RNA的提取 | 第25-26页 |
| · RT-PCR扩增天府肉鹅IFN-α基因 | 第26页 |
| · 天府肉鹅IFN-α基因的T-载体克隆与鉴定 | 第26-29页 |
| · 天府肉鹅IFN-α基因的T-载体克隆 | 第26-27页 |
| · 感受态细胞的制备及转化 | 第27-28页 |
| · 转化菌落的鉴定和筛选 | 第28-29页 |
| · 天府肉鹅IFN-α基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| · 数据 | 第30页 |
| · 分析方法 | 第30页 |
| · 表达载体的构建 | 第30-34页 |
| · 引物设计 | 第30-31页 |
| · 天府肉鹅干扰素-α成熟肽基因的PCR扩增 | 第31页 |
| · 扩增产物的回收与纯化 | 第31页 |
| · PCR纯化产物与克隆载体的连接 | 第31-32页 |
| · 连接产物的转化 | 第32页 |
| · 重组原核表达质粒的构建 | 第32页 |
| · 连接产物的转化 | 第32-33页 |
| · 转化菌落的筛选和鉴定 | 第33-34页 |
| · 重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第34-35页 |
| · 重组质粒pET-32-mTFGoIFN-α转化表达菌 | 第34页 |
| · 原核表达质粒pET-32-mTFGoIFN-α的诱导表达 | 第34页 |
| · 重组质粒表达条件的优化 | 第34-35页 |
| · 蛋白的纯化及鉴定 | 第35页 |
| · 兔高免血清的制备 | 第35-37页 |
| · 重组蛋白抗原的制备 | 第35页 |
| · 免疫程序 | 第35-36页 |
| · 琼脂扩散试验检测兔抗TFGoIFN-α抗体效价 | 第36页 |
| · Western-blot检测抗体特异性 | 第36-37页 |
| · 重组鹅IFN-α蛋白复性 | 第37-38页 |
| · 透析复性 | 第37页 |
| · Ni-IMAC纯化复性 | 第37-38页 |
| · 蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| · 鹅IFN-α重组蛋白抗VSV活性的研究 | 第38-39页 |
| · 鹅胚成纤维细胞培养 | 第38页 |
| · 鸭胚成纤维细胞培养 | 第38-39页 |
| · VSV效价TCID50的测定 | 第39页 |
| · 鹅IFN-α重组蛋白抗VSV活性 | 第39页 |
| · 定量PCR法检测鹅IFN-α重组蛋白抗小鹅瘟病毒活性 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-51页 |
| · 天府肉鹅IFN-α基因的扩增 | 第40-41页 |
| · TFGoIFN-α基因的扩增 | 第40-41页 |
| · TFGoIFN-α基因的T-克隆与鉴定 | 第41页 |
| · TFGoIFN-α基因生物信息学分析 | 第41-46页 |
| · TFGoIFN-α基因分析 | 第41-43页 |
| · TFGoIFN-α基因密码子特征分析 | 第43-46页 |
| · 重组表达质粒pET-32-mTFGoIFN-α的构建 | 第46-47页 |
| · 重组蛋白的表达及条件优化 | 第47-48页 |
| · 重组蛋白的表达 | 第47页 |
| · IPTG浓度的优化 | 第47-48页 |
| · 诱导时间的优化 | 第48页 |
| · 兔抗天府肉鹅IFN-α重组表达蛋白多克隆抗体的检测 | 第48-49页 |
| · 兔抗鹅IFN-α血清琼脂扩散试验的检测 | 第48页 |
| · 兔抗血清的Western Blotting检测 | 第48-49页 |
| · TFGoIFN-α重组表达蛋白复性 | 第49-50页 |
| · TFGoIFN-α重组表达蛋白复性效果检测 | 第49-50页 |
| · TFGoIFN-α重组表达蛋白复性后浓度测定 | 第50页 |
| · TFGoIFN-α重组表达蛋白抗VSV活性 | 第50-51页 |
| · SYBR Green real-time PCR测鹅IFN-α抗GPV活性 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-57页 |
| · 基因克隆引物和表达引物的设计 | 第51-52页 |
| · TFGoIFN-α基因特征分析 | 第52-53页 |
| · 诱导表达 | 第53-54页 |
| · 蛋白的复性 | 第54-55页 |
| · 鹅IFN-α重组蛋白抗病毒活性 | 第55-57页 |
| 第三章 结论 | 第57-58页 |
| 第四章 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66
页 |
